practica deshidrogenasa lactica

Universidad de sonora
Departamento de ciencias químico biológicas

Laboratorio de bioquímica II

Practica 2
Reacción de la deshidrogenasa láctica


Equipo:INTRODUCCION
La deshidrogenada láctica es una enzima que cataliza la reducción reversible del piruvato a lactato utilizando como agente reductor a la coenzima NADH. Esta reacción es el paso terminal quecaracteriza la glucolisis en el musculo de los vertebrados y la diferencia de otras formas fermentativas anaeróbicas del catabolismo de los carbohidratos.
La enzima pertenece al grupo de lasoxidoreductasas con el nombre técnico de L-lactato: NAD oxidoreductasa. La forma enzimática más común tiene una masa molecular de 140 000 Daltons y todas las de los vertebrados están formadas por tetrámeros,con cuatro sitios catalíticos. La enzima completa puede disociarse con pérdida de su actividad, a cuatro subunidades de 35 000 Daltons de masa molecular de casa una. Para eso se utilizan losdesnaturalizantes comunes de las proteínas como la urea, el cloruro de guanidino el dodecil sulfato de sodio.
Fue con esta enzima con la que los investigadores descubrieron la existencia de las isomerías, esdecir, modificaciones moleculares de la misma enzima.
La fuente de la enzima puede ser una suspensión de levaduras al 20% y se puede utilizar azul de metileno como aceptor de hidrogeno. Esto es muyútil ya que el azul de metileno cambia de color al pasar de oxidado a reducido. Es azul cuando esta oxidado e incoloro cuando esta reducido.
La levadura contiene pequeñas cantidades de lactato, elazul de metileno se decolora. La adición de lactado es una mayor concentración, acelera la reacción.


OBJETIVO
En esta sesión de laboratorio se determinara cualitativamente la actividad enzimáticade la deshidrogenada láctica o LDH y su inhibición.
MATERIALES Y METODOS.

1 Gradilla
4 pipetas de 5 mL
1 vaso de precipitado de 600 mL
4 tubos de ensaye de 15x150mm
1 pinza para tubo de...