Practica: Fermentacion

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OBJETIVOS
 Demostrar la formación de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por levadura.
 Producir e identificar ácido pirúvico a partir de glucosa.
 Observar elcomportamiento reaccionante del sistema.
MATERIAL
* Tubos de ensaye de 13 x 100
* Tubos de centrifuga
* Tripie, rejilla, anillo, mechero.
* Baño maría.
* Pipetas de 5 ml. graduadas.
*Centrifuga.
* Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.
* Pinzas para tubos de ensaye.
* Solución de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%
* Suspensión de levadura al 5 % enNa2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentación antes de su utilización).
* Ácido tricloroacético al 10%
* Nitroprusiato de sodio.
* 2,4 dinitrofenil-hidracina.
* Hidróxido de amonioconcentrado.
* Hidróxido de sodio 0.1N
* Sulfato de amonio sólido.
Nota: un día antes de la práctica llevar su levadura para fermentarla
METODOS Y TECNICAS
Formación de Piruvato:
 Marcar dosseries de tubos de 3 cada una y adicionar 3 ml. de las soluciones de glucosa a las diferentes concentraciones 0.5, 1.0, 2.0% a ambas series.
 A una de las series de tubos adicionarles 3 ml. desuspensión de levadura con fosfatos de sodio(0.213 g/100 ml) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 ml. de la suspensión de levadura con fosfatos de potasio(0.09 g/100 ml) y marcarlos como B.
Colocar todos los tubos en baño maría a 37º.C por 30 minutos y añadir posteriormente a cada tubo 1 ml. de TCA al 10% mezclado vigorosamente y centrifugar a 2500 r.p.m. por 10 minutos. Separar elsobrenadante y desechar el precipitado.
Identificación de Piruvato:
 Reacción con nitroprusiato de sodio
En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y hervirlo.
Adicionarle 0.5 gr. desulfato de amonio sólido y agitar.
Agregar dos gotas del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las paredes del tubo unas gotas de hidróxido de amonio concentrado, hasta la...