Practica Flavonoides



Facultad de Ciencias Químicas


Km.9 Carretera Colima-Coquimatlán, C.P. 28400, Coquimatlán, Colima.
Tel. int (+52) 312 3261163



Extracción, detección y cuantificación de flavonoides
Objetivo
Llevará a cabo la extracción, detección y cuantificación de flavonoides en 6 muestras de origen natural.

Introducción

Marco Teórico

Material por equipo

Solo el equipo 1: 5 matrazaforado de 10ml
Bata de laboratorio, guantes, lentes de seguridad y cubrebocas
Franela
Gradilla
Balanza analítica
Espectrofotómetro UV/Visible
Papel filtro Whatman No. 1
Mortero de porcelana con pistilo
5 Tubo de ensayo 15x 150
2 vasos pp 50ml
1 pipeta de 1ml
1 pipeta de 5ml
1 pipeta automatizada
1 puntilla 50 µl
1 matraz Erlenmeyer 250ml
1 pizeta con H2O destilada
1 vidrio dereloj
2 celdas de 1cm, 2ml vol.
1 embudo
1 plancha eléctrica
1 matraz aforado de 10ml
1 jeringa de extracción


Disoluciones y muestras biológicas en general

50 g Muestra de arándano, uva, manzana, petalos de flores amarillas, petalos de flores rojas , brócoli y cáscara de limón (1 muestra por equipo)
Disolución de NaOH al 3% (10ml)
Disolución de AlCl3 al 10% (5ml)
Disolución deKCH3CO2 1M (5ml)
Disolución de FeCl2 2mM (5ml)
Disolución de ferrozina 5mM (5ml)
Metanol (50ml)

Reactivos por sesión

HCl conc. 5ml
Gránulos de Zn
Limaduras de Mg
AcONa 1g
Ac2O 1g
NaOH 1g
CH3OH 50ml
AlCl3 1g
KCH3CO2 1g
FeCl2 .01g
Ferrozina .01g
Quercetina .1g
Zn















Preparación de reactivos y disoluciones

Usar agua destilada en todos losprocedimientos y pasos del protocolo. Así mismo rotular siempre las muestras, reactivos y soluciones a utilizar.

Preparación del estándar de quercetina (sólo el equipo que realizará la curva)

La curva de calibración se realiza con soluciones de quercetina a diferentes concentraciones desde 12.5 a 100µg/ml en metanol (Chang et al., 2003).

1. Pesar .001g de quercetina y vaciar a un matraz aforado de10ml.
2. Agregar 1ml de metanol.
3. Aforar a 10ml con H2O destilada para de esta manera obtener una disolución stock de quercetina (.1g/L)
4. De la solución anterior, tomar 0.125 ml (12.5µg/ml), 0.25ml (25µg/ml), 0.5ml (50µg/ml) y 1ml (100µg/ml) con la pipeta de 1ml y trasvasarlos a un matraz aforado de 10 ml cada uno.
5. Aforar cada uno con H2O destilada.
6. Rotular adecuadamente.Disolución de NaOH al 3%
Pesar .3g de NaOH y vaciarlo a un matraz aforado de 10ml, aforar con H2O.

Disolución de AlCl3 al 10%
Pesar 1g de AlCl3 y vaciarlo a un matraz aforado de 10ml, aforar con H2O.

Disolución de KCH3CO2 1M
Pesar .9814g de KCH3CO2 y aforar en un matraz de 10ml con H2O.

Disolución de FeCl2 2mM
Pesar .00126 g de FeCl2 y aforar en un matraz de 10ml con H2O.

Disoluciónde ferrozina 5mM
Pesar .00510g de ferrozina y aforar en un matraz de 10ml con H2O.










Recomendaciones para el desarrollo de la práctica

Sesión de 3 horas. Previo a cada sesión a realizar se designará un equipo distinto para la preparación de soluciones y reactivos, asignado por el catedrático de la materia. Cada equipo manejará una muestra (arándano, uva, manzana, petalos deflores amarillas, pétalos de flores rojas, brócoli y cáscara de limón). Cada material es por equipo, los reactivos y soluciones son en general.

Al inicio de la práctica cada equipo se dividirá en 2 grupos, donde el grupo A se encargará de la parte A, mientras el grupo B se encarga de la parte B; así mismo se designará a un equipo para la preparación del estándar de quercetina y para laelaboración de la curva de calibración, donde el grupo A se encargará de esto y el grupo B se encargará de la obtención del extracto como primer paso, esto para agilizar tiempos. El material deberá estar listo en primeros 10 minutos como máximo.

Respecto a la medición espectrofotométrica, cada equipo contará con 10 minutos para tomar sus lecturas, por triplicado para reportar resultados y...