Practica Formación De Un Gradiente Discontinuo”

Introducción
Centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento rotatorio con una fuerza de mayor intensidad que la gravedad, provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de los principios en los que se basa la densidad: Todas laspartículas, por poseer masa, se ven afectadas por cualquier fuerza (origen de una aceleración). La centrifugación impone, gracias a la aceleración centrífuga, un efecto parecido al gravitacional: Las partículas experimentan una aceleración que las obliga a sedimentar. La centrifugación puede dividirse en primera instancia en dos grandes grupos: La preparativa y la analítica. En la primera, seobtienen grandes cantidades del material que se desea estudiar, mientras que en la segunda se procede al análisis de las macromoléculas en una ultra centrifugación. Existen diversos métodos de centrifugación y una extensa variedad de técnicas derivadas de esta.
El objetivo de la centrifugación es separar partículas de diferentes características. Para ello, se aplica un fuerte campo centrífugo, conlo cual las partículas tenderán a desplazarse a través del medio en el que se encuentren con la aceleración.
Gradiente de densidad es una variación en densidad sobre un área. El término se utiliza en las ciencias naturales para describir el variar de la densidad de la materia, pero puede aplicarse a cualquier cantidad que densidad pueda ser medida.
Consideraciones para elaborar un gradiente dedensidad:
• Poseer un amplio rango de densidad.
• No afectar la actividad biológica de la muestra.
• No hipo o hiperosmótica.
• Fácil remoción a partir del producto purificado.
• No sea sensible al rango de luz UV y visible.
• Económico y accesible.
• Esterilizable.
• No corrosivo, tóxico e inflamable.
•
En centrifugación en gradiente discontinuo se crea un gradiente por etapasen el interior de un tubo al apilar sucesivamente volúmenes homogéneos de soluciones de diferente densidad. En las interfaces de las diferentes capas se acumularán las partículas que flotan (son menos densas) en la capa inferior pero que se hunden (son más densas) en la capa superior.
Los gradientes discontinuos pueden ser hechos simplemente colocando una solución de baja densidad sobre otra másdensa, sin embargo una mejor interface puede ser obtenida si la solución más densa es colocada bajo la solución menos densa utilizando una jeringa con una aguja larga o una pipeta. El principal problema es que algunos solutos (ejemplo: cloruro de cesio) difunde rápidamente así que la interface desaparece rápidamente.
OBJETIVOS
• Desarrollar diferentes tipos de disoluciones a partir de unasolución stock
• Preparar las disoluciones con diferentes colores
• Percibir las disoluciones de acuerdo con la cantidad que se tienen cada tubo
• Separar las disoluciones en los tubos de ensaye sin mezclarse con las otras cantidades agregadas

MATERIAL Y METODOS
Tabla de material y soluciones ocupadas en la práctica.
Material Soluciones
1 jeringa y una aguja para raquea Solución stock desacarosa 1.5 M
6 tubos de ensaye colorantes vegetales

METODOS
1.- Preparar 40 ml de solución stock de sacarosa 1.5 M.
2.- Dar las diferentes escalas de densidad para cada solución desde 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, a partir de la solución de 1.5 M
3.- Preparar las diferentes soluciones en vasos de precipitado
4.- Agregar con la ayuda de una espátula una cantidad de colorante vegetal encada vaso de precipitado (verde, amarillo, rojo, azul, anaranjado) y agitar para diluir el colorante.
5.- Vaciar en cada tubo de ensaye un poco de cada solución.
6.- Después en un solo tubo de ensaye y con la ayuda de una jeringa y la aguja para raquea tomar 1 ml de una solución y depositarla en el tubo de ensaye.
7.- En un poco de agua destilada enjuagar la jeringa y volver a tomar otro ml de...