Practica Ley todo o nada

PROTOCOLO DE LA PRÁCTICA VIRTUAL
Neurociencia BCC-3
Se utilizará el programa Nerve (utilizado en BCC1) del Prof. Francisco Bezanilla
actualmente en la Universidad de Chicago (ver http://nerve.bsd.uchicago.edu/FB/).
1.- Seleccione Nerve de la página Electrophysiology and the molecular basis of
excitability (http://nerve.bsd.uchicago.edu/)

En el marco de esta práctica virtual trabajaremoscon el modelo de potencial de
acción propagado analizado en registros de voltaje en función del tiempo
(seleccione: V vs t -Propagated AP, enmarcado en rojo)
El preparado biológico incluido en el modelo consiste en un axón único al que se
le colocan 4 electrodos intracelulares: 1 de estimulación (stim) y tres de registro
electrodo negro (registra en el sitio de estimulación), electrodo azulcuya
localización pude ser modificada (a 2.5 cm del sitio de estimulación por defecto)
y el electrodo rojo (a 5 cm del sitio de estimulación). Las características del axón,
la concentración de los iones involucrados, parámetros de estimulación y
variables a representar gráficamente además del Vm, pueden ser modificadas
en las ventanas correspondientes seleccionadas en el menú de la derecha(enmarcado en azul). Antes de comenzar, cerciórese que todas las variables
coincidan con las opciones por defecto (Reset parameters, abajo derecha)
La ventana de “Propagated Action
Potential” muestra a la derecha los
controles del modelo. Inicio (Start, Stop
etc), las características del axón, el
estímulo a utilizar (pulse) y las
concentraciones
de
los
iones
involucrados.
El gráficorepresenta Vm en función del
tiempo (eje izquierda) y la corriente
transmembrana Im (eje derecha) trazado
en rojo) calculada para V1. En la flecha
seleccione blue para que el modelo calcule Im para V2. La aplicación del
estímulo por defecto provocará una respuesta en el electrodo proximal (negro,

V1) que se propagará activamente hacia la derecha. Se representan las
respuestas registradas porlos tres electrodos intracelulares (negro V1, azul V2 y
rojo V3).
1.- En la situación control (opciones
por defecto) aplique un estímulo de
acuerdo al siguiente protocolo y
observe la respuesta obtenida en
los 3 sitios de registro.
Familiarícese con el modelo
modificando la duración total del
barrido (total time). Modifique
asimismo la duración del delay, del
estímulo (pulse 1) y delpulse 2.
¿Como
es
la
corriente
transmembrana a nivel de V2?
Salida de corriente son hacia arriba
(valores positivos) y las de entrada
hacia abajo (valores negativos)
2.- EXCITABILIDAD
a.- Verifique la ley del todo o nada. Para ello, partiendo de las opciones por defecto (ver
protocolo), reduzca progresivamente la amplitud del pulse 1 en pasos de 0.5 µA. Para
cada estímulo mida laamplitud de pico de la respuesta obtenida en el electrodo proximal
colocando un cursor (click con el ratón). En caso de obtenerse una respuesta activa
propagada consigne además en que instante se produce el pico de la respuesta. En caso
contrario mida la amplitud de la respuesta colocando el cursor a 1.75 ms del inicio del
barrido. Complete el siguiente un cuadro de valores:

I del E (µA)
10.09.5
9.0
8.5
…..
…..
0.5
0.0

V1 (mV)

Grafique los resultados obtenidos. Analice la curva obtenida.
¿Cual es la amplitud del estímulo capaz de provocar una respuesta activa propagada?
¿Cual es el estímulo umbral?
¿Qué característica tiene la respuesta provocada por un estímulo de 8.0 µA?
¿Como explicaría este resultado? Establezca una hipótesis interpretativa. Consulte
acerca delconcepto de respuesta activa local.
b.- Repita la operación agregando 0.1 µM de TTX en la ventana referida a
concentraciones (concentration) y complete el cuadro de valores midiendo la amplitud en

V1 a 1.75 ms del inicio del barrido. Analice la gráfica obtenida y compare con la situación
experimental anterior. El resultado obtenido, ¿rechaza o confirma la hipótesis previamente
establecida?...