Practica Medio De Cultivo

Área
Laboratorio de Biotecnología Vegetal
Práctica No.
4

Duración
3 Horas
Nombre de
la Práctica
Preparación de medio MS de cultivo


Valor de esta práctica:


1. Introducción
Entre los factores más importantes a tener en cuenta para lograr la respuesta morfológica deseada en un cultivo de tejido in vitro, es la composición del medio de cultivo. El cual está conformado por macro ymicronutrientes esenciales para la supervivencia de la planta, nutrientes, hidratos de carbono, vitaminas, agentes reguladores del crecimiento y hormonas vegetales, que ayudarán a obtener un callo, una planta completa, a partir del explante elegido y algún agente gelificante inerte (gelrite, phytagel, etc.) (López Peralta, 1985). Los principales componentes de los diferentes medios de cultivo se presentan enel cuadro 1.

Las exigencias minerales varían con la especie, la naturaleza del tejido y su estado fisiológico, pero, además, también varían con el método de cultivo y el tipo de organogénesis estudiado. Por ejemplo, los meristemos y, en forma general, los tejidos con actividad metabólica elevada, pueden presentar importantes necesidades en potasio (Ozias-Akins & Vasil, 1985).

Murashige y Skoog(1962) propusieron un medio para la investigación del crecimiento óptimo de callos de la planta del tabaco (Nicotiana tabacum). Este medio es netamente superior a los medios anteriormente usados para iniciar la organogénesis y, particularmente, para la formación de yemas. A partir de estos resultados, el medio MS se ha empleado de una manera muy general para todos los tipos de cultivo in vitro.Además, puede afirmarse que ha sido la utilización del medio MS junto con el empleo de fitohormonas apropiadas (citocininas y auxinas), lo que ha permitido el éxito de los trabajos sobre organogénesis en cultivo in vitro. El medio MS está caracterizado, principalmente, por un contenido elevado de nitrógeno del cual 1/3 del total está aportado en forma reducida (NH4) y por una concentraciónigualmente elevada en potasio.

Los tejidos y células cultivadas in vitro son heterótrofos con respecto al carbono, debido a la ausencia o insuficiente asimilación por clorofila. Por lo que es indispensable añadir azúcares a los medios de cultivo, empleándose usualmente sacarosa y en algunos casos glucosa o fructosa, en concentraciones que varían entre 20–80 g/L, en dependencia del tipo de cultivo,material vegetal, etc. Los azúcares presentan una acción metabólica y energética (Hall, 2000).

Cuadro 1. Principales componentes del medio para cultivos vegetales in vitro.

Componente
Característica


Fuente de carbono
Generalmente, bajo condiciones in vitro las células vegetales no son autótrofas y por lo tanto dependen de una fuente externa de carbono. Usualmente sacarosa, y ocasionalmente glucosa(Ej., cultivos de algodón) o maltosa (Ej., cultivo de anteras).


Sustancias
inorgánicas
Macroelementos (N, P, K, Ca, Mg, S) y microelementos (Fe, Co, Zn, Ni, B, Al, Mn, Mo, Cu, I) en proporciones adecuadas.


Vitaminas
Vitaminas B1, B2, B6, vitamina H, vitamina E, ácido fólico, ácido nicotínico, entre otras.


Hormonas reguladores del crecimiento
Auxinas: promueven la elongación celular, laformación de callos y raíces adventicias, inhiben la formación de brotes axilares adventicios y, en ocasiones, inhiben la embriogénesis.
Citocininas: promueven la división celular, regulan el crecimiento y el desarrollo de los tejidos vegetales.
Otras: giberelinas, ácido absícico, etileno.


Suplementos orgánicos no definidos
Como agua de coco, extracto de papa, jugos o pulpas de frutas y/o verduras.Antioxidantes y adsorbentes
Compuestos que inhiben la generación de polifenoloxidasas con lo que se evita la oxidación de los explantes, como el carbón activado, los ácidos cítrico y ascórbico, la polivinilpirrolidona (PVP), entre otros.


Agente gelificante
Si se desea un medio con consistencias semisólida se puede agregar gelrite, phytagel, agar, etc.






2. Competencia específica
Conoce el...