practica microbiologia

PRÁCTICA No. 2




OBJETIVOS O PROPÓSITOS DE LA PRÁCTICA
Que el alumno:
Obtenga una muestra biológica a partir de un exudado faríngeo y de un fermento lácteo como el yogurt o yakult.
Aprenda a elaborar preparaciones fijas de muestras, ya que es dispensable para realizar una tinción.
Ejercite un método de tinción diferencial en el cual se utilizan más de un colorante y divide a lasbacterias en dos grupos, Gram + y Gram.
Observe preparaciones fijas y teñidas y distinga las formas de las bacterias, sus agrupaciones y si son Gram + o Gram.
MARCO TEÓRICO
Investiga y contesta brevemente lo que a continuación se solicita.
1. Preparación fija
Para no observar la movilidad de un microorganismo es preciso que esté fijo. Para lograrlo se agrega formol, dejar reposar la preparacióndespués se lava y se le agrega colorante y se vuelve a lavar y por último se observa en el microscopio.
2. Tinción de Gram:
a. ¿Para qué se usa?
La tinción de Gram es una prueba esencial y obligatoria a realizar en el laboratorio de microbiología. Es una etapa preliminar que se utiliza para diferenciar las bacterias Gram positivas de las Gram negativas.
b. ¿Qué nos permite diferenciar?
Lasbacterias Gram positivas de las Gram negativas.
c. ¿Cómo?
Las bacterias Gram positivas retienen la tinción azul y bacterias Gram negativas quedan decoloradas
d. ¿Quién creó la técnica?
Hans Christian Joachim Gram
3. ¿Qué función tienen los siguientes reactivos en la tinción de Gram?
a. Colorante cristal violeta
(Colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Grampositivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana.
b. Lugol (yoduro potásico, I₂)
Retener el colorante cristal violeta. El I₂ entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el colorante cristal violeta.
c. Alcohol
Sirve para realizar la decoloración ya que en este es soluble el complejo I₂ /cristal violeta
d. Safranina
Se usa para diferenciar unaestructura celular previamente teñida con otro colorante.
4. ¿Qué sustancia constituye al lugol?
El lugol o solución de Lugol es una disolución de yodo molecular I₂ y yoduro potásico KI en agua destilada.


BIBLIOGRAFIA
http://medaflojera.blogspot.mx/2006/12/cuestionario.html
http://www.slideshare.net/edersouzza/uso-de-las-tinciones-en-microbiologahttp://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20090418154254AAeZFyP
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://es.wikipedia.org/wiki/Lugol
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2012/ir122f.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram




PLANTEAMIENTO DE LA HIPÓTESIS
Si preparamos un frote fijo con una muestra de un exudado faríngeo y otro frote con una muestra de un producto lácteo fermentado como yakulto yogurt, y los teñimos con la tinción de Gram, ¿podremos observar si los microorganismos presentes son Gram positivos o negativos, sus formas, y agrupaciones entre otras características?


MEDIDAS DE SEGURIDAD
Tomar con cuidado las muestras.
Debes usar bata y lentes de seguridad.
Antes de abrir la llave de paso de gas doméstico, cerciórate de que las llaves de suministro de gas esténcerradas.
Cuando se trabaja con flamas, se debe evitar tener el pelo o parte de la ropa sueltos debido a que pueden caer en la flama.
Nunca debes tratar de alcanzar algo pasando alguna parte del cuerpo sobre la flama.
Las indicadas para el buen manejo del microscopio compuesto.


DISEÑO EXPERIMENTAL

MATERIAL
REACTIVOS
Abatelenguas (3)
Agua destilada
Asa bacteriológica
Cerillos
Cintaadhesiva de celulosa transparente
Cubreobjetos
Etiquetas adheribles
Gotero
Hisopos estériles (3)
Lápiz graso
Mechero de bunsen
Pinzas para disección (2)
Piseta con agua destilada
Portaobjetos
Tijeras
Varillas de vidrio para tinción

Aceite de inmersión
Agua destilada
Alcohol en frasco donde quepan los portas
Alcohol – acetona
Colorante cristal violeta (violeta de genciana)...