practica microbiologia

PRACTICA No. 5
PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICAR BACTERIAS

OBJETIVO GENERAL
El alumno identificará diferentes especies de bacterias, a través de su metabolismo celular.

Objetivos específicos.
• El alumno realizará pruebas para determinar la actividad enzimática sobre los carbohidratos y sales orgánicas como principales fuentes de carbono.
• El alumno realizará pruebas de hidrólisispara aminoácidos y proteínas para demostrar su actividad enzimática.
• El alumno realizará pruebas para demostrar la actividad enzimática en los procesos de óxido-reducción.

INTRODUCCIÓN

Para poder realizar una identificación bacteriana es necesario primero sembrar por estría a los microorganismos, ya que generalmente se parte de un cultivo mixto, de esta manera se logra aislar y observarsu morfología colonial. Una vez que se tiene el cultivo puro, se transfiere a un medio de cultivo en la cual se desarrolle, para poder lograr estos pasos es necesario saber la temperatura óptima de crecimiento. Cuando se tiene el cultivo puro, se procede a realizar la tinción de Gram para clasificarlo y saber a qué grupo pertenece G+ ó G-. Además en la morfología microscópica permite conocer laforma y agrupación del microorganismo (bacilo, coco, coma, etc.).

La identificación bacteriana preliminar pueden efectuarse observando las características de las colonias y la morfología microscópica, pero la caracterización final de un aislamiento bacteriano desconocido en género y especie se logra mediante la detección de ciertos sistemas enzimáticos exclusivos de cada especie.

Elmetabolismo es un proceso químico, mediante el cual los seres vivos transforman una serie de compuestos químicos con el fin de obtener energía. Los microorganismos son capaces de efectuar reacciones bioquímicas para degradar nutrientes cuyos productos finales permiten su identificación, a este grupo de reacciones se les denomina pruebas bioquímicas, las cuales se han clasificado según su origen:

a)Reacciones de carbohidratos (almidón, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, etcétera).
b) Reacciones para sales orgánicas (citrato, malonato, urea).
c) Reacciones para proteínas y aminoácidos (gelatina, caseína, triptófano, lisina, arginina y ornitina).
d) Por el tipo de respiración que efectúan (aerobios estrictos, microaerofílicos, anaerobios facultativos y anaerobios estrictos).

En ellaboratorio estos sistemas se detectan inoculando una pequeña porción de la colonia aislada a una serie de medios de cultivo que contienen substratos específicos, e indicadores químicos que detectan los cambios de pH o la presencia de un subproducto.












MATERIAL, EQUIPO, REACTIVOS Y CEPAS MICROBIANAS

MATERIAL


Laboratorio Alumnos
Espátulas H2O2 al 3%
Tubos de ensaye 13x100Alcohol 70°
Pipeta 5 mL Gasa
Matraz Erlenmeyer 50 mL Algodón
Matraz Erlenmeyer 250 mL Asa bacteriológica/ aguja bacteriologica
Mecheros de Bunsen Papel aluminio
Probetas 100 mL Portaobjetos
Pisetas 5 Cajas Petri desechables estériles (Grupo)
Gradillas




EQUIPO

Balanzas analíticas digitales
Autoclave
Incubadora a 35 °C

CEPAS
Bacillus subtilis
Escherichia coliEnterobacter sp.
Staphylococcus aureus
Salmonella sp.
Proteus vulgaris



MEDIOS Y REACTIVOS
Medios Reactivos
TSI Peptona de caseína
LIA Extracto de carne
MR-VP NaCl
MIO Almidón
Caldo urea Agar bacteriológico
Agar citrato de simmons Kit Gram
Reactivo de Kovac
Lugol

















DESARROLLO EXPERIMENTAL

A. IDENTIFICACIÓN MICROSCOPICA
1. Tomar un inoculo delcultivo bacteriano para realizar una tinción de Gram, observarla al microscopio para la caracterización morfológica.

B.-SIEMBRA DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Prueba Medio Placa/tubo Forma de inocular
Hidrólisis de almidón Agar/almidón Placa Sembrar por estría simple
TSI TSI Tubo, pico de flauta Sembrar por punción y estría
LIA LIA Tubo, pico de flauta Sembrar por punción y estría
Citrato...