PRACTICA NO.14. AISLAMIENTO DEL DNA TOTAL Y SU CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Químico Farmacéutico Industrial.
PRACTICA NO.14. AISLAMIENTO DEL DNA TOTAL Y SU CARACTERIZACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA.
3FM2.






El primer paso en cualquier análisis genético suele ser el aislamiento del material genético. Los métodos de extracción del DNA se remontan a 1896 cuando Miescherconsiguió extraer el esperma de salmón o de los leucocitos humanos lo que entonces denominó nucleína y que hoy sabemos que es el DNA.
Existen numerosas variantes metodológicas para purificar el DNAdependiendo del tipo de material de partida (sangre, tejidos, bacterias, levaduras) basado en solubilidad o precipitación diferencial de DNA o basado en su afinidad a diferentes tipos de matrices.Normalmente el DNA se extrae a partir de muestras que contienen células nucleadas, ya que en el núcleo es donde está el ADN genómico. No obstante en algunos métodos se analiza el DNA circulante presente en elplasma, que es un DNA degradado en forma de fragmentos del tamaño de mononucleosomas, y que procede de los fenómenos apoptóticos que ocurren en distintos tejidos del organismo. También la detección decargas virales se realiza a partir de DNA presente en el plasma.


Aislamiento del DNA a partir de leucocitos.







Realizar un método por el cual se obtendrá y purificará el DNA apartir de una guayaba.
Obtener el espectro de absorción del DNA.




















Cálculos

Pureza.
Pureza=A_260/A_280 = (0.167)/(0.133)

= 1.25

2.0100%
1.25 x

= 62.7819%

Concentración del DNA.
C= A_260/22500*factor de dilución.

C= (.167)/22500*2=0.00001484Gg/ml


1.0 A_(260 ) 50µg
0.167 x
8.35 µg x 2= 16.7 µg/ml


Factor de dilución













Bases nitrogenadas Rf ADN hid. RNA hid. ADN pull RNA pull
Adenina 0.54 0.53 0.53...