PRACTICA No6

PRACTICA No.6
PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA HUMANA
( SUERO DE COOMBS)
1. ANTECEDENTES.
Esta prueba se describió por primera vez en 1908 por Moreschi, quien aconsejo su empleo para acelerar y reconocerla aglutinación bacteriana.
Este método se emplea para la identificación de anticuerpos llamados criptaglutinoides.
Es la mas eficiente y de mayor valor para banco de sangre.
2. INTRODUCCIÓN
Estaprueba se divide en dos:
Prueba de coombs directa. Permite establecer la sensibilización de eritrocitos que tuvo lugar in vivo, O sea en el organismo.
Prueba de coombs indirecta. Sensibilización deeritrocitos in vitro.
3.- FUNDAMENTO
Detecta inmunoglobulinas de la clase IgG y/o fracciones del complemento (C3D), unidos a los glóbulos rojos.
4.- MATERIAL Y APARATOS.
POR EQUIPO.
-Gradilla
-Tubos12x75 mm
-Pipeta serológica de 5ml
-Pipeta serológica de 1ml
-Equipo para punción
-Tubos al vacío con EDTA
-Tubos al vacío sin anticoagulante
-Algodón con alcohol (70%)


POR GRUPO.
-Centrífuga
-BañoMaría a 37°C
Reactivos.
-Suero antiglobulina humana( suero de Coombs)
-Solución de tripsina al 1%
-Solución salina isotónica
-Células control de Coombs
MATERIAL BIOLÓGICO
-Sangre obtenida con EDTA-Sangre obtenida sin anticoagulante
-Eritrocitos O Rh positivos
6.- METODOLOGÍA
Prueba de Coombs directa
1.- En un tubo de ensayo, colocar 0.5ml de eritrocitos de sangre problema y lavar tres vecescon solución salina isotónica.
2.-Despues de último lavado, resuspender los eritrocitos con 5ml de solución salina para que quede una suspensión aprox de 2%.
3.-En otro tubo de ensayo, poner dos gotasde la suspensión de eritrocitos lavados, centrifugar y decantar el sobrenadante.
4.-Añadir dos gotas de suero de Coombs. Mezclar y centrifugar durante un minuto a 3000 rpm.
5.-Agitar suavemente el tuboobservando si hay aglutinación al desprenderse el botón de eritrocitos del fondo del tubo. Si este se observa, se informa la prueba como positiva.
6.-En caso de ser negativa, verificar la potencia...