Practica numero 5



DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA

PRÁCTICA NUMERO 5°





















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Objetivo:
Que el alumno aprenda el metodo colorimetrico de la cianometahemoglobina para laetermiancion de hemoglobina ya que dicho metodo es el mas empleado por presentar las siguientes ventajas:
1. la cianimetahemoglobina es estable en soluciones diluidas.
2. El metodo mide Hb, Metahb yCOHb. No mide SHb.
3. Existen en el mercado estanderes certificados de cianometahemoglobina.
4. Las lecturas se pueden hacer en espectrofotometro de uso comun como son el coleman y el Leitz.Fundamento:
La sangre se hemoliza por agregado de un agente tensoactivo. Con el ferriciano de potasio se oxida el hierro ferroso de la hemoglobina a ferrico para producir metahemoglobina. El cianuro depotasio estabiliza la metahemoglobina como cianometahemoglobina. La coloracion producida es directamente proporcional a la concentracion de la hemoglobna presente.

Generalidades: la hemoglobina es unaproteína conjugada que sirve para el transporte de O2 y CO2 cuando esta totalmente saturada cada gramo contiene alrededor de 14ml de O2 la masa total eritrocitos en un adulto contiene 600 gr dehemoglobina capaces de tranpostar 800 CO2

Material:
Material necesario para la extacion sanguinea
2 tubos de ensayo de 13 x 100 con tapon de hule
1 pipeta graduada de 5ml
1 pipeta de Sahli conboquilla
Equipo:
Espectofotometro con adaptador y 4 celda
Reactivos:
E.D.T.A. al 10%
Solucion de Drabkin
1 ampolleta de solucion estandar (acuglobin)

Técnica:
Solucion diluyente de Drabkin(cianometa)
Bicarbonato sodico…….………………………… 1g

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Cianuro potasio…………..…………………….0.05g
Ferricianuro potasico….…………………….0.02g
Agua destilada………….…………………….1,000ml

1) Colocar en un tubo de ensayoexactamente 5ml de solucion diluyente de Drabkin
2) La muestra de sangre puede tomarse de una puncion capilar que fluya libremente o de una vena. En el ultimo caso hay que mezclarla bien. Se...