Practica Nº 4 Preparacion En Fresco, Frotis Bacteriano Y Tincion Simple

PRACTICA Nº 4
PREPARACION EN FRESCO, FROTIS BACTERIANO Y TINCION SIMPLE
I. OBJETIVOS
* Analizar y comprender los procedimientos de obtención y manejo de muestras de heces mediante tinción simple.
* Reconocer e identificar las bacterias, protozoarios, y helmintos intestinales en la muestra de heces obtenida en cuanto a su forma y tamaño.

II. FUNDAMENTOS
Puesto que eldiagnóstico de las parasitosis intestinales del hallazgo de quistes o trofozoitos y gusanos adultos, larvas o huevos de helmintos en heces, la colección y el manejo adecuado de las muestras de heces son indispensables para la búsqueda e identificación de los parásitos en el laboratorio.
En las muestras de heces parasitadas, también vamos a observar la presencia de bacterias que se están moviendo.
El exámenmicroscópico directo de frotices teñidos constituye una manera eficiente para estudiar la presencia de bacterias en medios biológicos que normalmente son estériles como el líquido cefalorraquídeo y el líquido pleural. También se aplica a heces, orina centrifugada, esputo, pus y muestras que provienen de la secreción faríngea, cuello del útero, vagina, bronquios, etc.
El colorante es aquellasustancia que tiene la propiedad de comunicar color a otros cuerpos de cualquier naturaleza. Para que una sustancia sea colorante debe estar compuesta por: Molécula incolora + cromofero + auxocromo =colorante.
Los colorantes de mayor aplicación son los derivados de alquitrán de hulla (anilinas). Ejm: cristal violeta, violeta de genciana, fucsina básica o carbufucsina, safranina, azul de metileno yverde de malaquita. Actúan mejor mediante la adición de mordientes, porque aumentan la permeabilidad de la pared celular y la membrana citoplasmática.
En general, las bacterias tienen afinidad por los colorantes derivados de la anilina o especialmente por aquellos de carácter básico. Estos colorantes llevan en su parte cromófera carga electro-positiva, la que tendría una fuerte afinidad por losgrupos electro-negativos que normalmente presentan las bacterias en su protoplasma, entre los cuales se encuentran los ácidos nucleicos y sus derivados.
La coloración simple generalmente utiliza sólo un colorante, es fácil de realizar, se emplean con frecuencia los colorantes básicos tales como: cristal violeta, azul de metileno y fucsina básica. Se emplea con frecuencia para determinar el tamaño,forma y organización de las bacterias.
III. MATERIALES
Personales:
* Mandil
* Guantes descartables
* Láminas porta y cubreobjetos
* Microscopio ( Olympus)
* Gotero
* Aplicador de madera
* Jabón
* Toalla
* Piseta con agua destilada
* Lejía
* Frasco de vidrio
* Mechero
Biológicos:
* Agua residual industrial
* Heces fecales
Reactivos:* Azul de metileno
* Lugol
* Aceite de inmersión
IV. PROCEDIMIENTO
A. Preparación en fresco
Muestra líquida: Agua residual industrial
* Rotular la lámina enjuagada.
* Colocar una gota de la muestra líquida.
* Colocar la lámina cubreobjeto.
* Observar al microscopio utilizando los objetivos de menor a mayor aumento.
* Esquematizar las observaciones.
Muestrasólida: Heces de vacuno
* Rotula la lámina limpia.
* Colocar 2 gotas de lugol.
* Colocar con un aplicador de madera la muestra sólida con movimientos circulares.
* Colocar la lámina cubreobjeto.
* Observar al microscopio utilizando los objetivos de menor a mayor aumento.
* Esquematizar las observaciones.
B. Preparación coloreada
Muestra líquida: Agua residual industrial* Rotular la lámina limpia y colocar una gota de la muestra.
* Mezclar con el aplicador de madera haciendo un extendido.
* Fijar al calor hasta que la muestra se seque.
* Agregar 3 gotas de colorante azul de metileno por 1 minuto.
* Eliminar el exceso y enjuagar con agua destilada.
* Secar al calor.
* Observar al microscopio utilizando los objetivos de menor a mayor...