Practica Urocultivo

OBJETIVO.
Identifica la diferente flora patógena que puede desarrollarse en el tracto urinario. Aprender el manejo correcto de la toma de muestra.

FUNDAMENTO
Las infecciones urinarias pertenecen al grupo de los procesos infecciosos más
frecuentes de la patología médica. Su importancia radica en el daño que pueden ocasionar sobre la función renal. Las vías urinarias normalmente sonestériles por encima del nivel de la uretra distal. Los microorganismos que infectan las vías urinarias altas son comensales localizados en áreas vecinas. En esta colonización intervienen varios factores predisponentes que pueden ser de origen local o general. Los primeros incluyen la contaminación fecal del meato urinario, el cateterismo, la patología urinaria congénita o adquirida y el reflujo vesical.Entre los factores generales están la diabetes mellitus, el embarazo y la terapia con fármacos de amplio espectro. Las bacterias que con mayor frecuencia se aíslan de la orina de pacientes ambulatorios con infección urinaria son: Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticcus, Proteus sp, Klebsiella sp, Enterococcus faecalis etc. Para lograr que el cultivo de orina realmente sea veraz, requiereque las muestras sean obtenidas en condiciones óptimas.

MATERIAL:
*Asa bacteriológica
*Porta objetos
*Cubre objetos
*Mechero Fisher
*Cajas de Petri estériles
*Pipetas de 1ml estériles
*Tubos de ensayo conteniendo 9 ml de agua peptonada, estériles


EQUIPO
*Centrífuga Agar Salado manitol
*Microscopio Agar nutritivo
*Incubadora

SUSTANCIAS:
*Muestra de orina tomada en frascoestéril





PROCEDIMIENTO
El Urocultivo incluye:
1.- Aislamiento e identificación de microorganismos
2.- Cuenta viable
3.- Antibiograma para los gérmenes patógenos aislados e identificados
4.- Aislamiento e identificación de los microorganismos
5.- Mezclar perfectamente el frasco con la muestra de orina y depositar aproximadamente entre 5 y 10 ml de orina en un tubo.

6.-Centrifugarla durante 5 minutos a 3500 r.p.m.

7.- Se desecha el sobrenadante dejando solo unas gotas de orina residual para emulsionar el sedimento.

8.- Con la suspensión del sedimento se lleva a cabo el estudio microscópico directo, tomando una gota del sedimento que se deposita en un portaobjetos, colocándole un cubreobjetos.

9.- Observarlo al microscopio con el objetivo seco fuerte, e identificarlo observado.

10.- Mediante un asa de platino se hacen siembras por aislamiento en estrías del sedimento, obtenido al centrifugar una muestra de la orina colocada en tubo estéril y centrifugada. La siembra se realiza en los siguientes medios de cultivo. AS, Mc Conkey, ASM y EMB

11.- Los medios inoculados se incuban a 37°C entre 24 y 48 horas.

12.- Observar las características de cultivode las colonias desarrolladas en los diversos medios. Si es necesario, realizar pruebas bioquímicas para confirmación de la especie bacteriana.

13.- Preparar frotis para realizar una tinción de Gram para el estudio de morfología microscópica.

2) Cuenta viable

a) Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera:
Colocar 5 tubos estériles conteniendo 9 ml. de agua peptonada. Lacantidad de tubos utilizada dependerá de la carga bacteriana observada en el examen microscópico del sedimento urinario
Tomar 1ml. de la orina problema con una pipeta estéril,y agregarlo al tubo No.1. (dil. 1:10), agitar el tubo y tomar de este 1ml. para pasarlo al tubo No.2, (dil 1:100)
Realizar el mismo paso las veces que sea necesario rotulando el tubo con la dilución correspondiente.
Recuerdaque el número de diluciones dependerá de la carga bacteriana.

b) Colocar 1ml de cada dilución en diferentes cajas de Petri estériles y rotularlas con la correspondiente dilución.

c) Vaciar en estas cajas de 15 a 20 ml de Agar nutritivo fundido a Baño
María previamente enfriado hasta que alcance una temperatura que soporte la piel de tu mano (debes evitar que solidifique).

d) Mezclar...