practica


Tipos de PCR

PCR anidada

En esta variante de PCR, el producto de una amplificación es utilizado como moldepara realizar una segunda amplificación con iniciadores que se ubican dentro delaprimera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente específica.

PCR in situ

Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consisteen una reacción de PCR ensecciones histológicas o células, donde los productosgenerados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se realiza para ello unaprimera amplificación del ADN blanco y luego detección mediantehibridación insitu convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera puede detectarsecantidades pequeñísimas del material genético.

PCR multiplex

Es una PCR en la cual se amplifica más de unasecuencia en una misma reacción.Emplea dos o más pares de iniciadores en un único tubo de reacción con el fin deamplificar simultáneamente múltiples segmentos de ADN. Consiste en combinar enuna únicareacción todos los pares de iniciadores de los sistemas que queremosamplificar simultáneamente, junto con el resto de los reactivos de la reacción encantidades suficientes. La ventaja de esta PCR es quese obtiene la información devarios loci en una sola reacción, utilizando menor cantidad de molde para elanálisis y menor cantidad de reactivos. Se puede generar rápidamente laconstrucción de una basede datos.

PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)

Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de unatranscriptasa inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo deADNllamado ADNc (ADN complementario).

PCR tiempo real

Es una reacción de PRC cuya principal característica es que permite cuantificar lacantidad de ADN o ARN presente en la muestra original. Sepuede dividir en:a) Técnica basada en fluorocromos no específicos.b)Técnica basada en sondas específicas.En las técnicas basadas en fluorocromos no específicos, el ADN se une alfluorocromo (por lo...