Practica2



INTRODUCCION.
La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es hacer una preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco libre (“entre porta y cubre”) consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Las preparaciones en fresco se utilizan para observarmicroorganismos vivos. Por ejemplo, para la búsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales.
Sin embargo, el inconveniente de la observación en fresco es que no permite aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un microscopio óptico de campo claro, está bastante limitado. Una de las maneras más sencillas para estudiar la morfología de las bacterias, es hacer unaextensión delgada del material que las contiene (frotis) sobre un portaobjetos, fijarlas por calentamiento y luego teñirlas con ciertos colorantes.
Una de las más importantes coloraciones es la llamada “Tinción de Gram”. Es muy simple y la más usada por los bacteriólogos, pues por medio de ella, las bacterias pueden ser clasificadas en dos grandes grupos: unas llamadas Gram positivas y otras denominadasGram negativas.
El método fue descubierto por Christian Gram (1884) cuando trabajaba con cortes histológicos que contenían bacterias. Gram observo que cuando las secreciones histológicas eran coloreadas con violeta de genciana anilinado y después tratadas con solución acuosa de yodo, el colorante podía fácilmente ser removido por el alcohol de la sección de tejido, pero no así de las bacteriasque contenían este. Más tarde trabajando ya con bacterias solas, encontró que algunos organismos retenían la violenta de genciana y que otros eran rápidamente decolorados por el alcohol. Así las bacterias que quedaban coloreadas se les llamo Gram positivas (estas se observan de color violeta) y aquellas que son decoloradas por el alcohol son llamadas Gram negativas, estas quedan sin ningún color,por lo tanto no pueden ser observadas. Debido a esto en la técnica de Gram está incluido el uso de otro colorante, llamado de “contraste”, por ejemplo safranina o sushina, estos colorantes tiñen a las bacterias Gram negativas de un color rosado. También puede ser usado otros colorantes de contraste, por ejemplo verde malaquita y acido pícrico, los cuales dan un color verde o amarillo a lasbacterias Gram negativas permitiendo en esta forma una diferenciación evidente de color violeta.
En la observación microscópica, además de notarse la reacción al Gram (que indica gérmenes Gram positivos o Gram negativos), deberá mostrar la forma de las bacterias (cocos, bastones, fusiforme y otros). La apariencia de las bacterias en los frotis teñidos con Gram no permite la identificación de las especies.Los informes de cocos Gram positivos en cadenas sugieren estafilococos. Los bacilos Gram negativos pueden ser grandes, pequeños o aun coco bacilares. Algunas bacterias Gran negativas tienen forma variable y las bacterias Gram positivas no variables pueden tomar la tinción Gram negativa. En forma clásica, la forma bacteriana se ha definido utilizando microorganismos que han proliferado en agar.Sin embargo, las bacterias en los líquidos y tejidos corporales tienen una forma sumamente variable.
OBJETIVOS.
Practicar la tinción Gram.
Determinar la clasificación de las bacterias en estudio.
Anotar su forma y disposición.
MATERIAL Y METODOS.
A. MATERIAL BIOLOGICO.
Cultivo propagados en caldo nutritivo de 24 horas de edad de:
Escherichia coli.
Bacilius subtilis.
Klebsiella pneumoniae.Staphylococcus aureus.
B. REACTIVOS QUIMICOS.
Aceite de inmersión.
Un juego de colorantes para tinción de Gram.
Cristal-Violeta.
Safranina.
Alcohol-Acetona.
Solución de Yodo.
C. MATERIAL Y EQUIPO.
Asas bacteriológicas.
Portaobjetos limpios sin grasa.
Mechero.
Microscopio.
D. PROCEDIMIENTO.
1. Preparación de frotis.
En un portaobjetos, limpio y sin grasa, se coloca una gota de agua destilada estéril....