Practicas bio

 


 


 


 

1
 

PRÀCTICA
  1.
  AÏLLAMENT
  DE
  MICRORGANISMES
  AMB
  ACTIVITAT
 
PROTEOLÍTICA,
 CARACTERITZACIÓ
 I
 OPTIMITZACIÓ.
 

 
Introducció
 

 
L’objectiu principal de la Biotecnologia és obtenir productes metabòlics útils a partir de
material biològic. La utilització de microorganismes és molt àmplia, is’utilitzen per a la
producció de centenars de productes diferents relacionats amb la indústria farmacèutica,
alimentària, producció de detergents, etc…. Fins ara els productes microbians que
s’utilitzen són majoritàriament produïts per microorganismes aïllats del medi natural, ja
que són més fàcils d’introduir al mercat que els microorganismes manipulats
genèticament.
Això implica que per acomençar a produir un determinat producte, primer s’ha d’aïllar
el microorganisme adient, pel que és molt important contar amb els medis de selecció
adequats, en els que sigui fàcil identificar la producció, és a dir, en que el producte
d’interès causi un efecte fàcilment identificable. Quan ja s’ha aïllat el microorganismes
adequat, el que cal fer és optimitzar les condicions de cultiu per tald’aconseguir la
màxima producció. Aquesta optimització passa per la caracterització de la producció en
diferents condicions de temperatura, pH, requeriments nutricionals, medis de cultiu,
etc… Els medis de cultiu que s’utilitzen a la indústria han de ser òptims però a la
vegada econòmics, i facilitar el màxim l’aïllament posterior del producte.
La darrera etapa, després d’obtenir el microorganismei optimitzar les condicions de
cultiu, passaria per la millora genètica de l’organisme utilitzat, per exemple, mitjançant
mutagènesi.
Les proteases constitueixen el segon grup d’enzims més utilitzats industrialment,
després de les amilases. S’utilitzen principalment a la indústria làctia i de producció de
detergents, i també a la indústria farmacèutica, en la producció d’hidrolitzats deproteïnes, en la indústria alimentària i en el processament d’aigües residuals. Les
proteases que produeixen els microorganismes poden ser de diferents tipus, alcalines,
neutres o àcides, en funció del rang de pH al que són actives.
Les proteases alcalines, produïdes principalment per microorganismes del gènere
Bacillus, són sobre tot útils a la indústria dels detergents: acostumen a ser establesa
temperatures elevades, són estables a pH alcalins i també en presència de determinats
agents quelants. Les proteases neutres són més inestables que les alcalines, són
sensibles a la temperatura i actives en marges de pH més estrets. S’utilitzen
principalment a la indústria alimentària. Les proteases àcides s’utilitzen principalment
en la producció de formatges, i en la indústria alimentàriaen general.
En aquestes pràctiques es farà un aïllament de bacteris productores de proteases a partir
de diferents tipus de mostres, obtindrem els cultius purs corresponents als
microorganismes aïllats, i s’analitzaran les característiques de les proteases pel que fa a
l’activitat en diferents condicions d’assaig. Analitzarem també la influència de la
composició del medi de cultiu en laproducció de les proteases.
 


 

2
 

Aïllament
 de
 microorganismes
 productors
 de
 proteases
 

 
S’utilitzaran mostres de sòls de diferents orígens per tal de fer un aïllament de
microorganismes productors de proteases. Per això, a partir de les diferents mostres es
sembraran plaques d’un medi de cultiu que ens permeti directament fer la selecció delspossibles productors de proteases. El medi utilitzat serà un medi ric, TSA (agar de triptona i
soja), suplementat amb llet descremada al 1%. La presència de llet produeix certa terbolesa
del medi, i conté com a font de proteïna la caseïna de la llet, que en ser hidrolitzada per les
possibles proteases provoca la pèrdua de terbolesa del medi, pel que es poden detectar els
productors de...