Practicas bioquimicas

INDICE DE PRÁCTICAS
PRACTICA Nº 1………………………………………………………………… 4
TITULO: Espectro de absorción del azul de metileno
PRACTICA Nº2 ………………………………………………………………… 7
TITULO: Medida colorimétrica de glucosa pura
PRACTICA Nº3…………………………………………………………………11
TITULO: Curva de calibrado de glucosa
PRACTICA Nº4…………………………………………………………………15
TITULO:Determinación cuantitativa de proteínas totales
PRACTICA Nº5…………………………………………………………………19
TITULO: Determinación cuantitativa de la actividad de α-amilasa
PRACTICA Nº6…………………………………………………………………21
TITULO: Calibrado del peachímetro
PRACTICA Nº7…………………………………………………………………24
TITULO: Determinación cuantitativa de transaminasas GPT
PRACTICA Nº8…………………………………………………………………27
TITULO: Preparación del gelde agarosa
PRACTICA Nº9…………………………………………………………………29
TITULO: Electroforesis de proteínas totales en suero
PRACTICA Nº10..………………………………………………………………32
TITULO: Uso del refractómetro manual
PRACTICA Nº11..………………………………………………………………35
TITULO: Determinación de Hemoglobina A1C
PRACTICA Nº12..………………………………………………………………38
TITULO: EspermiogramaPRACTICA Nº1
TITULO
Espectro de absorción del azul de metileno

OBJETIVO
Encontrar la longitud de onda a la cual el azul de metileno presenta mayor absorbancia o pico de absorbancia.

FUNDAMENTO TEORICO
Dentro de todos los colores del espectro y la longitud de onda asociada a esos colores hay que buscar dicha longitud de onda para determinado color. Debemos de elegir un radio decolores de longitud de onda para localizar el pico de máxima absorción.
Para buscar la longitud de onda de máxima absorbancia de un cromógeno, hay que hacer un rastreo de medidas en distintas disoluciones y a diferentes concentraciones en un rango de longitudes de onda que se correspondan con el complementario del color que observamos porque esas longitudes de onda absorbe mucha mas radiación estecromógeno.

UTILIDAD
Elegir la longitud de onda optima para las medidas fotométricas de un espectrofotómetro para una disolución concreta.

MATERIAL
Papel de filtro, guantes, gradilla, tubos de ensayo, matraz aforado de 10ml, cubetas espectrofotómetro, micropipeta 10- 100 µL, puntas de micropipeta, vaso de precipitados y rotulador.

MAQUINARIA
Colorímetro Cecil.

REACTIVOS
Azul demetileno y H2O destilada.


PROCEDIMIENTOS
Procedimientos:
1º- Preparación de tres tubos de azul de metileno con concentraciones a partir 1/1000(madre) de esta 10 mL y luego las demás: 1/10000 y 1/100000. Se preparan con un reactivo comercial al 1% con un volumen final de 1mL por cubeta. Tras realizar las diluciones les aplicamos diferentes longitudes de onda para observar el pico de máximaabsorción.
Tubo Nº
Dilución
mL de azul de metileno
mL de H2O
1(madre)
Vf= 10 mL
1/1000
0,01
9,99

2
1/10 sobre la madre=
1/10000
0,1 de la madre

0,9

3
1/10 sobre el tubo 2=
1/100000
0,1 de el tubo 2

0,9
Las longitudes de onda utilizadas para la determinación son las siguientes:
450, 525, 575 y 700.




2º Hacer un espectro de absorción con la dilución 1/10000 condiferentes longitudes de onda: 450, 500, 550, 600, 625, 650 y 700.
La absorbancia a las diferentes longitudes de onda es la siguiente:
Longitud de onda
Absorbancia
450
0,03
500
0,03
550
0,03
600
0,11
625
0,155
650
0,23
700
0,09
La realización del espectro de absorción queda de la siguiente manera:

Conclusión:
En el ejercicio 1º no conseguimos determinar el pico máximo de absorcióndebido a algún fallo en la realización de el pipeteo o en la recogida de los volúmenes apropiados. Lo que si podemos observar es una creciente ascensión de la recta según íbamos aumentando la longitud de onda lo que nos sugiere que el punto de máxima absorción estaba cerca. También podemos determinar que el pico máximo de absorción se encuentra en el color rojo entre los 650 y 750nm.
En el...