Practicas de laboratorio tercer trimestre uam-x

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TRONCO COMUN DIVISIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD.

MODULO: ENERGIA Y CONSUMO DE SUSTANCIAS FUNDAMENTALES.

PRACTICA No. 3

“HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR AMILASA VEGETAL”

EQUIPO

-Carrera Cabanzo René.

-Casimiro Reyes Rufo.

-Díaz Argumedo Elizabeth.

-Núñez Medrano Juan Ángel.

Profesora:
QFB. María Guadalupe Eugenia Vázquez Lizardi.

Grupo: BC02BTrimestre 07/O

INTRODUCCION

El almidón está compuesto de dos polisacáridos, la amilosa y la amilopectina. Su hidrólisis produce maltosa, que es un disacárido y la hidrólisis de la maltosa da alfa glucosa (exactamente alfa d - glucopiranosa), que es el producto de la hidrólisis total.
El almidón contiene un 20% de una fracción soluble en agua llamada amilasa y un 80% de otra insoluble,llamada amilopectina. Por tratamiento con ácido o por acción enzimática, estas fracciones se hidrolizan lentamente dando sucesivamente: Dextrina (una mezcla de polisacáridos de bajo peso molecular), (+)-maltosa y finalmente D-(+)-glucosa (una mezcla de todo esto se encuentra en el jarabe de cereal, por ejemplo). Tanto la amilasa como la amilopectina, entonces, están formadas por unidades deD-(+)-glucosa, pero difieren en su tamaño y forma molecular.
El almidón es un polímero constituido de dos tipos de enlaces: alfa 1-4 en la amilasa y alfa 1-6 en las ramificaciones de amilopectina. La hidrólisis del almidón puede ser biológica, mediada por enzimas o en un laboratorio por la acción de algún ácido. La hidrólisis por enzimas se inicia en la boca por la acción de la amilasa salival y luegocontinua por el jugo gástrico y la amilasa pancreática.
El almidón se hidroliza en dextrinas, acrodextrinas, maltosa y, finalmente, libera sólo moléculas de glucosa. El producto final son moléculas de glucosa que serán utilizadas para producir energía metabólica.

METODO:

1. Primero pesamos 12 semillas de fríjol.
2. Acto seguido se molieron las semillas en un mortero usando 3 ml de aguadestilada por cada gramo de tejido.
3. Con el embudo y con dos capas de gasa filtramos la molienda.
4. Mantuvimos el filtrado en un tubo de ensaye. Dejamos que sedimentara y se mantuvimos en baño de hielo.
5. Se diluyó el filtrado 1:10 con la solución de acetato pH 5.0 (se siguió manteniendo en baño de hielo).
6. Se preparó la mezcla de reacción en dos tubos de ensaye (13 x 150mm) (A y B) a los cuales se les aplicó la misma cantidad de almidón al 0.2 % buffer pH 5 y de solución CaCl-NaCl lo mismo (4 ml a cada tubo).

ENSAYO A

1. Se prepararon 10 tubos de ensaye y a cada tubo se le agregó 1 ml de solución de Yodo
2. A un tubo le agregamos 3 ml de agua destilada: este tubo nos servirá para calibrar el espectrofotómetro.
3. Etiquetamos los tubos aintervalos de 5 minutos.
4. a cada uno de los tubos se agregaron 1 ml. de la enzima diluida, esto se hizo con los otros tubos a intervalos de 5 min durante 40 min.
5. Después se agitaron todos los tubos. Y se agregaron a cada tubo 2 ml de agua destilada.
6. Después se fueron colocando cada uno en las celda paea así poder leer la absorvancia a 620nm en el espectrofotómetro.

ENSAYO B1. Se prepararon 10 tubos de ensaye a los cuales se les agregó 1 ml de la solución de DNS (ácido 3,5 – Dinitrosalicilico).
2. A un tubo le agregamos 2 ml de agua destilada el cual nos servirá para calibrar 575 nm el espectrofotómetro a 100% de transmitancia o cero de absorbancia (densidad óptica)
3. Al primer tubo; al igual que en el ensayo A se marcaron en intervalos de 5 min. Para asíagregar a cada uno de los tubos que contienen la enzima la solución de DNS en un intervalo de 40 min.
4. A cada tubo se le agregó 8 ml de agua destilada y agitamos,( también agitamos el tubo que se usará para calibrar)
5. Se calentaron los tubos a baño maría durante 10 min. Después se tuvieron que enfriar en un vaso de precipitados con hielo y agua.
6. Después fueron colocados en las...