Practicas De Laboratorio

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TUXTEPEC
PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I
M.C. Rosalba Fernández Velasco.


Obtención y estimación de la actividad de la catalasa, peroxidasa y lafenol oxidasa.

Objetivo: Aislar las enzimas mencionadas y poder estimar su actividad catalítica.

Introducción: Estas enzimas pertenecen al grupo denominado Óxido reductasas presentes en la mayoríade las plantas y de los microorganismos aunque resulta difícil diferenciar la actividad de ambas enzimas puesto que usan sustratos similares, se diferencian en su velocidad ya que la peroxidasa es másactiva que la polifenoloxidasa.


Material y equipo:

• Licuadora
• Cuchillos
• Pelador
• Baño de hielo
• Baño María
• Vaso de precipitado de 150 ml.
• Matrazerlenmeyer de 125 ml.
• 12 tubos de ensaye
• 1 gradilla
• Algodón
• Extracto de papa
• Catecol al 1%
• Goma de guayacol al 1.5%
• Tirosina 0.1%
• Peróxido dehidrógeno
• NaCN al 5%
• Tolueno



Procedimiento:



Lave, pele y muela 5 papas pequeñas. Coloque la papa ya molida en 100 ml. de agua en un baño de hielo, deje reposar por 15 minutosagitando ocasionalmente. Filtre la mezcla a través de algodón (doblado 4 veces) exprima y colecte el líquido en un vaso de precipitado o en un vidrio de reloj. Decante el líquido del almidón, el cualse encuentra en el fondo y regréselo al baño de hielo. Use esta preparación como una fuente de ambas enzimas (extracto de papa).

Prepare una serie de tubos como se muestra a continuación:T U B O S
Sustancia |1 |2 | 3 |4 |5 |6 | 7 |8 | 9 |10 |11 |12 | |Catecol al 1% |0.5 |0.5 |0.5 |0.5 |--- |---- |---- |--- |--- |--- |0.5 |--- | |Guayacol 1.5% |--- |--- |--- |--- |0.5 |0.5|0.5 |0.5 |--- |--- |--- |0.5 | |Tirosina 0.1% |--- |--- |--- |--- |--- |--- |--- |--- |2 |2 |--- |--- | |H2O2 al 3% |--- |0.5 |--- |0.5 |--- |0.5 |--- |0.5 |--- |0.5 |0.5 |0.5 | |NaCN al 5% |--- |---...