Practicas De Microbiología Dietetica

Practicas de laboratorio



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Trabajo realizado por: José Català Crisóstomo
2ºciclo g.s. dietética y nutrición







Practica nº 1

Prueba de rojo de metilo

Introducción:

Una de las características taxonómicas que se utilizan para identificar los diferentes géneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporción de productos de fermentación que seoriginan por la fermentación de la glucosa.
Se conocen dos tipos generales: la fermentación ácido-mixta y la fermentación del 2,3 butanodiol. En la fermentación ácido mixta se forman fundamentalmente acido láctico, acético y succínico, además de etanol, H2 y CO2. En la vía del butanodiol se forman cantidades menores de ácido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol,etanol, H2 y CO2.

El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4(rojo),que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por la vía de fermentación ácido mixta.

El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este serevela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia

Objetivos:
El objetivo de este práctica es identificar si nuestra muestra contiene enterobacterias.

Materiales:
-2 vasos de precipitados
-vidrio de reloj y cucharilla
-varilla
-placa calentadora
-5 tubos de ensayo y gradilla
-pipeta y prepipeta
-papel de aluminio y algodón graso
-autoclave
-mechero bunsen
-asa desiembra
-estufa
Microorganismos:
Enterobacter fecalis, Escherichia coli, Salmonella y Bacillus
-medio de cultivo Voges-Proskauer

Reactivos:
-150 ml de etanol, 100 ml de agua oxigenada y 0,05 g rojo de metilo.


Técnica:
1-Lo primero que tenemos que hacer es preparar el medio de cultivo. Para eso necesitamos calcular y calentar la cantidad de agua que vamos a utilizar y calcular y pesar elmedio de cultivo en seco.

5 tubos × 20 ml = 100 ml pero vamos a preparar 120 ml de medio de cultivo
1000 ml agua…………..17 g medio de cultivo seco
120 ml agua……………2,04 g medio de cultivo en seco

2-Cuando tenemos el agua caliente con la ayuda de una varilla mezclamos el medio de cultivo con el agua hasta que este quede totalmente disuelto.
3-Después con la ayuda de una pipeta ponemos 20 mldel medio de cultivo en cada uno de los tubos, los tapamos con algodón graso y papel de aluminio y lo ponemos a esterilizar durante 20 minutos a 121ºC
4-Cuando el medio ya esta esterilizado y a temperatura ambiente se pueden inocular los tubos
5-se enciende le mechero bunsen para crear un medio estéril y con una asa de siembra se coge una muestra del microorganismo que queremos inocular y seintroduce un el medio de cultivo. Se agita un poco tubo y se mete en la estufa a 37ºC durante 24 horas.
6-Después de incubarlo se le añade 5 gotas del reactivo y observamos los resultados.


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Resultados:
Cuando realizamos esta prueba el laboratorio hemos usado placas de Petri en lugar de tubos de ensayo y por eso la práctica no nos ha dado los resultados correctos. Los resultados queteníamos que obtener son los siguientes:
• En los tubos donde inoculamos Escherichia coli y Bacillus el resultado sería positivo, el medio cambiaria a un color rojo por que el PH es menor se 4,3 y también se puede observar la producción de gas
• En los tubos donde sembramos Enterobacter fecalis y Salmonella el resultado seria negativo, no hay producción de gas y el medio no cambia del color por queel PH es más 4,3.





Practica nº 2


Prueba del citrato Simons

Fundamento:

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando una alcalinización del medio.
Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes...