Practicas de microbiologia.

PRACTICA No. 3

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO PARA TINCIÓN SIMPLE

OBJETIVO:

1.- Prepara un frotis bacteriano para su posterior tinción
2.- Realizar dos tipos de fijaciones y saber en que casos se recomienda una u otra.
3.- Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
4.- Practicar con el microscopio el correctoempleo del aceite de inmersión.

MATERIAL POR GRUPO:

Cristal violeta al 1% en agua
Safranina al 0.5% en agua
Agua estéril
Aceite de inmersión
Cultivos bacterianos ya sea en caldo o en medio sólido
Pizeta con agua.
Solución higienizante (Yodo, Fenol o Cloruro de benzalconio)


MATERIAL POR EQUIPO:

Microscopio compuesto
Asa de nicromo calibrada
3 portaobjetos
Mechero bunsen
Papelde limpieza para lentes

PROCEDIMIENTO:

1.- Preparación del frotis bacteriano:

Colocar una pequeña gota de agua en un portaobjetos limpio.
Con el asa de siembra previamente flameada y fría transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota. Remover la mezcla hasta formar una suspensión homogénea y extenderla para facilitar su secado.

Nota: Si el material departida es un cultivo medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos, basta con colocar y extender la muestra de la suspensión bacteriana directamente sobre el portaobjetos.

Esperar hasta que la fina película del líquido se evapore o bien acelerar este proceso con un ventilador o un secador. No eliminar el líquido calentándolo al mechero pues las células se pueden deformar oromper.

Fijación de las bacterias al vidrio del portaobjetos.
Por calor: pasar 3 veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos, dejar enfriar el portaobjetos entre estos pasos.
Con metanol Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. Retirar de inmediato el exceso del metanol del portaobjetos, golpeándolo por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo.Esperar a que el metanol se evapore completamente.

2.- Procedimiento para la tinción simple:

Cubrir los frotis con suficiente colorante, uno de ellos puede ser con cristal violeta y el otro con safranina.

Dejar que el colorante actué por 1 o 2 minutos.

Lavar las preparaciones con agua para eliminar el exceso del colorante. Para llevar a cabo esta actividad necesita inclinar elportaobjetos para que se derrame todo el colorante y colocarlo al chorro del agua en la parte superior del frotis, permitiendo que resbale por el frotis y se lleve el resto de colorante.
Cuidar de que la presión del chorro del agua no sea tan alta y no dirigir el chorro del agua directamente sobre la extensión de las bacterias, ya que podría arrastrar parte de él consigo.

Esperar a que se elimine lamayor cantidad del agua lo puede hacer con un pedazo de papel absorbente, evitando rozar la parte de la preparación y tinción.


Una vez seco el frotis observar la preparación al microscopio con el objetivo seco débil (10X) para enfocar bajar la platina sin sacar el portaobjetos.

Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el portaobjetos y observar con el objetivo de inmersión (100X).CUESTIONARIO:

1.- ¿Que fin tiene la fijación de las muestras al realizar un frotis?



2.- Con los resultados de una tinción simple ¿se puede saber si la muestra es procedente de un cultivo puro?


3.- Anote algún otro tipo de colorante que se puede utilizar para realizar una tinción simple.



4.- ¿Para que me sirve realizar una tinción simple?




5.- Señale 2ventajas y 2 desventajas de la tinción simple con respecto de las preparaciones en fresco.














PRACTICA No. 4

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO PARA TINCIÓN AL GRAM

OBJETIVO:

1.- Familiarizarse con los aspectos teóricos y prácticos de las tinciones diferenciales.
2.- Desarrollar el procedimiento para la diferenciación de las bacterias en dos grandes grupos:...