Practicas Lab

CENTRO DE CIENCIAS BÁSICAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA



LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II

Practica No. 3B
MEDICION DE LA ACTIVIDAD DE LA UREASA (SEGUNDA PARTE)

Lic. En análisis químico biologicos


5° semestre

Profesor:

Dr. Daniel Cervantes García


Integrantes del equipo:

Jorge Alexaid Badillo Tovar
Nayeli Catalina Delgado Murillo
Saira Ibeth Hernández Ruiz
Alma YazminLópez Montoya









Aguascalientes, Ags. 06 de Marzo de 2013

INTRODUCCION
Al interactuar con el sitio activo de la enzima (E), el sustrato (S) forma con ésta el complejo enzima-sustrato (ES), en donde el sustrato reacciona mucho más fácil y rápidamente que en ausencia de la enzima, por una disminución de la energía de activación. A partir del complejo enzima-sustrato resultan losproductos (P) de la reacción, y la enzima queda en su condición original, lista para aceptar otra molécula de sustrato:
[pic]
De acuerdo con la ley de acción de masas, la velocidad de la reacción 3 será proporcional a la concentración [ES], la cual a su vez depende de [E] y [S]. Como E vuelve a quedar disponible al final de la reacción, podemos concluir que la velocidad de la reacción (expresadacomo se explicó en el punto anterior) es directamente proporcional a [S].
Esta reacción es válida sólo cuando [S] es baja, y deja de serlo cuando aumenta. Con valores muy altos de [S] la velocidad ya no cambia aunque [S] se siga aumentando, o sea que se ha alcanzado una velocidad máxima (que se expresa como Vmax).
Por lo anterior Michaelis y otros autores concluyeron que los sitios activos de lasenzimas existen en un número limitado, y que a bajas concentraciones de sustrato no están saturados. En cambio a altas concentraciones se saturan y las moléculas de sustrato deben esperar a que las anteriores se conviertan en los productos y así desocupen los sitios activos (se habrá alcanzado entonces la velocidad máxima). Al duplicarse la concentración de la enzima hay un número doble de sitiosactivos, y por tanto la velocidad máxima se duplica.1

OBJETIVOS
Constatar el efecto que produce la modificación de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática de la ureasa, así como calcular y graficar las variables involucradas a fin de visualizar el comportamiento enzimático.



MATERIAL Y REACTIVOS
• 9 Matraces Erlenmeyer de 50mL
• 9 Matraces Erlenmeyer de 152mL• 3 Pipetas (1,5,10mL)
• Micropipetas de vol. variable (10-1000uL)
• Soporte Universal
• Pinzas de Bureta
• Bureta de 25mL
• Baño María (50°C)
• Buffer de fosfatos 0.05M, pH 7.2
• Urea 0.25M (250umol/mL)
• Bicloruro de mercurio al 1% (p/v)
• HCl 0.02M (20umol/mL)
• Rojo de metilo 0.1% (p/v) en etanol al 60% (v/v)
• Extracto crudo deureasa







PLANTEAMIENTO

Vamos a observar el Efecto de la Variación de la Concentración de Sustrato [S] sobre la Velocidad de la Reacción (Vo) Catalizada por la Ureasa.




| |Matraz |
|Reactivo | |
||1 |2 |
| |[S] concentración inicial del sustrato (µmol/ml) |VCT (ml) |velocidad inicial de reacción (µmol/min) |
|1 |1.3 |9.5 |3.16 |
|2|2.6 |13.1 |4.3 |
|3 |5.2 |14.8 |4.9 |
|4 |10.4 |7.5 |2.5 |
|5...