Practicas microbiologia

Prácticas de Microbiología
2º Curso (Lic. Biología)

Departamento de Microbiología y Genética
Universidad de Salamanca

Práctica 1
TÉCNICAS DE MICROBIOLOGÍA BÁSICA: RESIEMBRA DE MICROORGANISMOS, MICROSCOPIO ÓPTICO y TINCIONES. AISLAMIENTO Y MANEJO DEL

Introducción 1. Obtención y mantenimiento de cultivos puros
El trabajo con microorganismos no se realiza con células aisladas, sino conpoblaciones extensas y homogéneas del microorganismo a estudiar. Por lo tanto, el microbiólogo utiliza técnicas que permiten obtener un cultivo puro, y luego cultivar a gran escala dicho microorganismo. Para obtener cultivos puros se han de utilizar instrumentos estériles, es decir, libres de otros microorganismos no deseados (contaminantes). La esterilidad se consigue por diferentes métodos: 1.2. Calor seco. Para material de vidrio y de metal. Estos objetos (envueltos en papel o aluminio) se someten a una temperatura de 170°C durante al menos 90 minutos. Calor húmedo. Se utiliza para soluciones acuosas y plásticos. Este material se somete a una temperatura de 120°C durante 20 minutos en una atmósfera de vapor de agua a elevada presión, lo cual evita la ebullición. Se realiza en elautoclave. Filtración. Para esterilizar soluciones termolábiles, a las que se hace pasar a través de un filtro con un tamaño de poro que permite el paso de la solución, pero no de los microorganismos. Esterilización química. Se utiliza para esterilizar material (generalmente algunos tipos de plástico) termolábil. Se utilizan sustancias como el óxido de etileno, que se eliminan una vez finalizado elproceso de esterilización. Radiación. La radiación UV o las radiaciones α o γ pueden utilizarse para esterilizar habitaciones o algunos plásticos.

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Para poder estudiar los microorganismos en el laboratorio el microbiólogo también debe utilizar medios de cultivo que posean los nutrientes necesarios para el crecimiento de los mismos. Si los nutrientes están en forma de soluciónacuosa hablamos de medios de cultivo líquidos, mientras que si añaden solidificantes, como la gelatina o el agar (2-3%), obtenemos medios de cultivo sólidos. A veces se utilizan medios de cultivo semisólidos, si la concentración de agar es 0,6-1,5%. Los medios de cultivo se esterilizan mediante calor húmedo. Para aislar un microorganismo de una mezcla de varios y obtener un cultivo puro del mismo, latécnica más utilizada es la de siembra por estría en placa Petri, en medio sólido, que permite obtener colonias separadas de individuos que proceden por división de una única

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célula. Estas colonias nos sirven para iniciar un cultivo a gran escala. Otra técnica consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petrihasta conseguir colonias aisladas. Una vez que se ha obtenido un cultivo puro, se puede mantener haciendo resiembras en tubos de agar inclinado o bien congelando las células en glicerol (10-30%) a -80°C, en nitrógeno líquido a -173°C, o mediante liofilización.

2. El microscopio
El microscopio es el instrumento más necesario para un microbiólogo, ya que permite la observación de organismos queno pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de los microorganismos. Existe una gran variedad de microscopios que, según la fuente de iluminación utilizada, se agrupan en: • Microscopios ópticos: La fuente de iluminación es la luz. De campo claro. Permiten la observación de preparaciones, en su color natural o contrastadas mediante tinciones, resaltadas sobre un fondo más brillante.De campo oscuro. Permiten la observación de formas celulares que destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue utilizando diafragmas especiales. De contraste de fases. Gracias a la utilización de diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las rodea, permiten la observación de células...