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SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCIÓN
OBJETIVOS
Aplicar la técnica de cromatografía por adsorción para la separación de dos colorantes.
Comprobar la separación con base en el perfil de elución.
FUNDAMENTO
La cromatografía líquida de adsorción se caracteriza por utilizar una fase estacionaria sólida (Adsorbente) de carácter polar yuna fase móvil líquida (Eluyente) apolar, y se utiliza para separar sustancias de polaridad parecida. En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria la constituye un sólido poroso finamente granulado, siendo el proceso de adsorción debido a las atracciones intermoleculares dipolo-dipolo o puentes de hidrógeno entre los componentes de la muestra y el adsorbente. El adsorbente más utilizado esel gel de sílice, aunque también se utiliza alúmina activada: debe tenerse en cuenta que la capacidad de retención de un adsorbente varía en función de su grado de activación que a su vez depende del contenido en agua: La activación requiere eliminar de su superficie el agua adsorbida, operación que se lleva a cabo por secado prolongado a vacío y alta temperatura; aunque un exceso de activaciónpuede producir adsorciones irreversibles e incluso reacciones catalíticas indeseadas. Por otra parte, la fase estacionaria debe ser químicamente inerte con las sustancias que se pretenden separar, por lo que hay que tener en cuenta que el gel de sílice tiene carácter ácido, mientras que la alúmina puede adquirirse con carácter ácido, básico o neutro. La fase móvil está constituida por una mezcla dedisolventes que deben ser, al menos, parcialmente solubles. Para una fase móvil determinada, cuanto más polar sea la sustancia de la muestra, más va a ser retenida por la fase estacionaria (o menos arrastrada por la fase móvil), mientras que por lo que respecta a la velocidad de elución de una sustancia determinada, depende de la naturaleza de la fase móvil: cuanto más polar sea la fase móvilmás se desactivará la fase estacionaria y, por lo tanto, menos retenida quedará la sustancia en cuestión.
RESULTADOS
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno.
Volumen de elución ml
A493
A668
Volumen de elución ml
A493
A668
3
0.033
0.046
51
0.040
0.040
6
0.166
0.049
54
0.027
0.027
9
2.055
0.028
57
0.015
0.015
12
0.7800.008
60
0.009
0.009
15
0.255
0.006
63
0.006
0.006
18
0.043
0.003
66
0.003
0.003
21
0.019
0.003
69
0.002
0.002
24
0.011
0.002
72
0.001
0.001
27
0.008
0.005
75
0.001
0.001
30
0.010
0.007
78
0.001
0.001
33
0.012
0.042
81
0.001
0.001
36
0.014
0.165
84
0.001
0.001
39
0.021
0.188
87
0
0
42
0.027
0.255
90
0
0
45
0.040
0.718



480.049
1.133





Especifique y defina los elementos del sistema cromatográfico para esta separación
Adsorbente: alumina básica. Soporte: columna
Eluyente: agua y alcohol ácido Soluto: fluoresceína y azul de metileno.
Define el término de adsorción y empleando fórmulas esquematice que fuerzar intermoleculares participan en elproceso de separación de los solutos.
Adsorción:atracción de las moléculas o iones de una sustancia en la superficie de otra.
Interacción dipolo-dipolo
Dipolo permanente-dipolo inducido.
Dipolo instantáneo-dipolo inducido
Considerando las propiedades de solubilidad de los colorantes, indique que modificaciones haría para invertir el orden de la elución.
Debido a que el azul de metilenoes un compuesto menos polar que la fluoresceína, es decir menos soluble en agua; lo primero que haría sería resusupender la alumina en alcohol acido para que así, cuando empaquetamos y coloquemos la mezcla de colorantes, el azul de metileno no tendrá tanta afinidad por la alumina, por lo que comenzará a eluir primero, ya posteriormente cambiamos el eluyente por agua para que se separe la...