Practicas

TAE [50 x] | |
Tris Base | 242 g |
EDTA | 100 mL |
CH3COOH | 57.1 mL |


Buffer de carga [6x] | Para 25 mL (4°C) |
Azul de bromofenol | 0.25 % (p/v) |
Xilencianol | 0.25 %(p/v) |
Glicerol | 30 % (p/v) |

Reactivos
* Ácido acético
* Azul de bromofenol
* Xilencianol
* Glicerol
* Agarosa
* Agua destilada
* Tris
* EDTA
* SDS
*Bromuro de etidio

Preparar las soluciones para su almacenamiento.
Preparar 10 mL de EDTA 0.5 M u ajustar el pH=8.
Preparar 100 mL de la solución de TAE [5x], de esta preparar 100 mL de la solución TAE[1x].
Preparar 25 mL de la solución buffer [6x].

Electroforesis:
1. Preparar el gel de agarosa, colocando en un matraz Erlenmeyer 50 mL de la solución TAE [1x] y 0.5 g de agarosa (usandoguantes y pesar directamente en el matraz, si llegara a pasar el peso desechar el sobrante), calentar a 55°C.
2. Lavar la cámara de electroforesis y los peines son SDS y agua destilada. Y secar.
3.Colocar la cinta adhesiva en los bordes para poder agregar el gel de agarosa.
4. Una ves hecho lo anterior colocar los peines para que se formen los pozos.
5. Dejar que gelifique, retirarlos peines y la cinta adhesiva.
6. Colocar el molde en la cámara de electroforesis y agregar TAE [1x] hasta que el gel quede cubierto.
7. Tomar 7 µL de la solución buffer [6x] con lamicropipeta y con una punta nueva.
8. Colocar 1 µL de esta solución (siete puntitos) en una tira de papel parafilm, y dejar esa punta solo para esa solución.
9. A cada micro litro agregar 2 mL de agua(dejando esta punta solo para al agua) y agregar 3 mL de la muestra de DNA.
10. Recolectar el contenido de todo lo anterior con ayuda de la Micropipeta, succionando y dejándolo sobre el mismopapel parafilm 2 veces para que se tenga una buena mezcla.
11. Colocarlo en uno de los pocillos formados en el gel de agarosa, tomando en cuenta que en el primer pocillo de cada parte no se coloca...