Practicasde bioquimica

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PRACTICAS
Asignatura: “BIOQUÍMICA”































INDICE


INTRODUCCIÓN

1. CULTIVO EN MEDIO SOLIDO DEL ALGA VERDE UNICELULAR C. reinhardtii.

1.1 Preparación del medio de cultivo. 1 por mesa cada (8 parejas).
1.2 Preparación del medio de cultivo sólido. 1 por mesa cada (8 parejas)
1.3 Inoculación e incubación delcultivo
1.4 Observación de las colonias


2. DETERMINACIÓN DE LOS COMPONENTES CELULARES EN HOJAS DE ESPINACA

2.1. Determinación del contenido en agua de la hoja de espinaca
2.2. Determinación del contenido en clorofila
-2.2.A. Extracción de pigmentos en hoja de espinaca
-2.2.B. Determinación de clorofila
-2.2.C. Determinación del Espectro de Absorción de la clorofila

2.3.Determinación del contenido en proteínas y carbohidratos
-2.3.A. Preparación de un extracto crudo de hojas de espinaca
-2.3.B. Determinación del contenido en proteínas
-2.3.C. Determinación del contenido en carbohidratos


3. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA FOSTATASA ALCALINA DE INTESTINO DE TERNERA

3.1. Variación de la actividad enzimática con la concentración
3.2. Cálculo dela Km y la Vmax




















Guía breve para el trabajo en el laboratorio de Bioquímica y reporte de prácticas
1. Determinación del pH y preparación de soluciones amortiguadoras
2. Propiedades iónicas de los aminoácidos
3. Identificación de aminoácidos y proteína

3. Separación de plásmidos en geles de agarosa
4. Determinación del tamaño de un fragmento deDNA clonado en un
Plásmido
5. Aislamiento de plásmidos de Escherichia coli mediante mini preparaciones
6. Propiedades iónicas de los aminoácidos
7. Identificación de aminoácidos y proteína
8. Cromatografía en capa fina y/o papel
9. Solubilidad y desnaturalización de proteínas
10. Determinación aproximada del punto isoeléctrico
11. Métodos espectrofotométricosy determinación de proteínas
12. Actividad de la amilasa sobre el almidón
13. Identificación de carbohidratos





INTRODUCCIÓN

El objetivo de estas prácticas es el de familiarizar al alumno de primer curso en elconocimiento y manejo de algunas técnicas y aparatos de uso común en un laboratorio de Bioquímica. Se ha diseñado para ello, utilizando organismos fotosintéticos (microalgas, espinacas) como material biológico de partida, un esquema de prácticas que permitirá al alumno realizar cultivos celulares y determinaciones cuantitativas de moléculas biológicas mediante técnicas colorimétricas, aprendiendo ausar un espectrofotómetro UV/Vis. Conocerá, de esta forma, cómo realizar una recta de calibrado e interpolar los resultados obtenidos. Aprenderá asimismo a preparar un ensayo de actividad enzimática, y a evaluarla mediante determinaciones espectrofotométricas.


CÓMO HACER REGRESIONES LINEALES

Durante el desarrollo de las prácticas obtendremos series de datos experimentales. Para hacercálculos habrá que asignar datos al eje de las “x” y datos al eje de las “y” y representamos gráficamente unos frente a otros obteniendo puntos entre los que existe una relación lineal y que pueden unirse mediante una línea recta.

El problema general consiste en encontrar la recta que mejor se ajusta a los puntos obtenidos. Este ajuste puede dejarse a la iniciativa de cada experimentador (método librede ajuste de curvas) o definir la curva de ajuste mejor como aquella que tiene la propiedad de que la suma de los cuadrados de las desviaciones de la curva real respecto a los valores experimentales es mínima. Una recta con esa propiedad se llama recta de mínimos cuadrados siendo la ecuación de la recta:


La ecuación de la recta de mínimos cuadrados y su representación gráfica también...