prctia de hemoglobina

PRACTICA 4
CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA
Objetivo: Se basa en la transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobinamediante los siguientes pasos: En primer lugar el Fe2+ de la hemoglobina, enpresencia de ferricianuro potásico, se oxida a Fe3+, dando lugar a la metahemoglobina. Posteriormente, y en presencia de cianuro potásico, la metahemoglobina pasa acianmetahemoglobina. Este es uncompuesto estable, de color rojo, con un pico deabsorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodoscalorimétricos empleando un patrón de concentración conocida.
Material:tubos de ensayo
Pipetas de seguridad
Espectrofotómetro ofotocolorimetro
Cubetas para colorimetría

Reactivo:
Reactivo de Drabkin:
Ferricianuro potásico 20 mM
Cianuro potásico 43 mMConservantes y estabilizantes
•Estándar equivalente a 20 mg de hemoglobina/dl.
•Sangre total anticoagulada con EDTA

Procedimiento:
1. Preparamos tres tubos rotulados como B ,P y M.
Tendremos granprecaución al pipetear el reactivo de Drabkin, ya que contiene cianuro potásico y es muy toxico.
2 .El tubo B es el blanco de reactivos, porque el reactivo de Drabkin es de color amarillo y, aunque encondiciones normales su absorbencia debe ser cero, nos aseguramos de no incluir errores en la técnica. Lo utilizamos como blanco de la técnica y hacemos la lectura del problema frente a el.

3. El tuboP es el patrón, se lee directamente, ya que esta preparado comocianmetahemoglobina equivalente a una concentración de hemoglobina de 20 g/dl. Dado que no precisa manipulación, y que es estable encondiciones de conservación adecuadas , no es necesario medir su absorbencia (D.O.) en cada determinación.
4. El M es la muestra, donde se mezcla el problema con el reactivo de Drabkin.Encendemos el fotocolorímetro o el espectofotómetro y procedemos de la siguiente forma:
• Introducimos la fecha
• Pulsamos para la medición de observancias
• Técnica colorimétrica monocomática
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