Precipitación De La Caseína

Paz Trejo Cynthia A.
Facultad de ciencias, UNAM
7/02/11

Biología Molecular de la célula 1
Laboratorio.
Práctica 2-
-Precipitación de la caseína de la leche



Introducción


Los métodos de purificación de las proteínas son de suma importancia para su estudio, su estudio para su comprensión y su comprensión para su aplicación.
Existen diversos métodos de purificación y separación,que dependiendo de la proteína que se desee aislar y sus propiedades, se escogerá el método más apropiado para su separación.
La caseína es una fosfoproteína que se puede encontrar en la leche o sus derivados, y contiene del 70-80% de las proteínas presentes es la leche. Lo cuál la lleva a considerarse como una de las principales y más importantes proteínas de los lácteos.
En su caso sabemos quees una fosfoproteína (un tipo de heteroproteína), es decir, son un grupo de proteínas unidas a una sustancia que contiene ácido fosfórico, cuya característica en común es que precipitan a un p H ácido de 4.8. A este punto (en el caso de la caseína) se le conoce como punto isoeléctrico.
El punto isoeléctrico se da en moléculas de carácter antipático; cuando una molécula presenta dualidad decargas, es decir, tiene cargas tanto negativas como positivas le es posible disolverse fácilmente ya que puede crear enlaces con las otras moléculas alrededor, sin embargo es posible llevar esta molécula antipática a un estado neutro en el cuál haya la misma cantidad de protones que de electrones, de esta manera podemos aislar a la molécula o proteína (en el caso de la caseína) ya que no crearáenlaces mas que consigo misma. A este punto en el cuál se puede llevar a la molécula a un estado neutro, se le llama punto isoeléctrico; normalmente se logra alterando el pH.
Una vez logrado este punto, es posible centrifugar la proteína para lograr una mejor purificación y entonces usarla.


Resultados y Discusión


|HCL 2% (gotas=ml) |pH|Cambios observados |
|O |7.04 |Estado homogéneo |
|15 = 0.6 |6.26 |sin cambios |
|25 = 1 |6.02|Sin cambios |
|35 = 1.4 |5.86 |Sin cambios |
|46 = 1.8 |5.66 |Sin cambios |
|61 = 2.4 |5.14|Se comienza a separar |
|66 = 2.6 |5.07 |Estado heterogéneo |
|72 =2.9 |4.87 |Estado heterogéneo |
|74 = 3 |4.81|Precipitación total |




Este paso fue de suma importancia, pues como se mencionó en la introducción, es aquí la primera fase en donde se aísla (en su mayoría) la caseína del resto de la leche; llevando la caseína a su punto isoeléctrico exacto impedimos que otra molécula ajena a la caseína se una a la precipitación lograda, pues muchas otras moléculas tendrán su punto a 5o a 4.5.
Durante la adición de HCL quisimos hacerlo lo más exacto posible, por ello añadimos el ácido gota a gota con la pipeta Pasteur, sin embargo eso ocasionó problemas al intentar definir cuantitativamente los mililitros, pues la pipeta Pasteur no está graduada. Lo que se hizo después fue hacer una aproximación lo más cerca posible de la realidad, poniendo las 74 gotas añadidas a la leche...