Precipitación de Proteínas

Bioquímica General
Práctica no.3 Precipitación en una proteína



























Introducción:
En la presente práctica que realizaremos sobre proteínas, podremos observar la proteína del huevo, es decir la albumina, se realizarán algunas técnicas de agentes desnaturalizantes de proteínas para poder observar sus componentes, ósea los aminoácidos, y cadauna de sus reacciones que se producen con diferentes sustancias que se le agregaran.

Objetivo General:
Estudiar algunos agentes desnaturalizantes de proteínas, es decir la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.

Marco teórico
Cuandola proteína no ha sufrido ningún cambio en su interacción con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa (Figura inferior). Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Estado nativoEstado desnaturalizado



Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitarán la agregación intermolecular y provocará laprecipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización y se dice entonces que la proteína se encuentra desnaturalizada (Figura superior).

En una proteína cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan sólo tienen en común la estructura primaria, es decir, la secuencia de AA que la componen. Los demás niveles de organización estructuraldesaparecen en la estructura desnaturalizada.
La desnaturalización provoca diversos efectos en la proteína:
1. cambios en las propiedades hidrodinámicas de la proteína: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusión
2. una drástica disminución de su solubilidad, ya que los residuos hidrofóbicos del interior aparecen en la superficie
3. pérdida de las propiedades biológicas

Una proteínadesnaturalizada cuenta únicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalización es reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la información necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuración. El proceso mediante el cual la proteína desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalización. Esta propiedad esde gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificación de proteínas, ya que no todas la proteínas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalización conduce a la pérdida total de la solubilidad, con lo que la proteína precipita. La formación de agregados fuertemente hidrofóbicos impide su renaturalización, y hacenque el proceso sea irreversible.
 

Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica). Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en:la polaridad del disolvente
la fuerza iónica
el pH
la temperatura

Procedimiento:
Tubo No.1
1
2
3
Clara de huevo filtrada, diluida 1:3
30ml
30ml
30ml
HCL 01N(ml)
10ml
-
-
NaOH 01N(ml)
-
1.0ml
-
H2O
-
-
1.0ml
Observación
Al agregar el HCL en la pipeta que contenía clara de huevo pudimos observar cómo se tornaba de un blanco como si se volviera espeso.
Al agregar el NaOH no...