Precipitación Isoeléctrica De La Caseína De La Leche
Páginas: 3 (666 palabras)
Publicado: 13 de marzo de 2013
Precipitación isoeléctrica de la caseína de la leche
Fundamento
En las proteínas, como en los aminoácidos y en cualquier molécula anfotérica, las cargas pueden ser neutralizadas de manera talque la carga neta sea cero. Este proceso se realiza al modificar el pH de medio en el que se encuentren estas moléculas. En el caso especial de las proteínas, se aprovecha esta propiedad parapurificarlas. Si en una mezcla de proteínas se alcanza el punto isoeléctrico de una de ellas, ésta se precipita, mientras que el resto quedan disueltas. La razón es que la composición química de cada proteínaes característica y presenta un número distinto de grupos ionizables que se neutralizan a pH diferente. La caseína es una de las fosfoproteínas de la leche que se precipita a pH de 4.8. Estapropiedad se puede explotar para purificarla simplemente al acidificar el medio.
Procedimiento
1. preparar 300 mL de leche descremada a una concentración de 65 g/L con agua destilada
2. diluir 50 mL de laleche descremada anterior con agua destilada 1:4. Ponerla en un vaso de precipitados de 500 mL y agitar. tomar 5mL y almacenar a 4°C.
3. precipitar la caseína a partir de los 195 mL de la lechediluida titulando hasta alcanzar el pH isoeléctrico de 4.8, con HCl al 2%, midiendo el pH constantemente.
4. Dejar reposar a temperatura ambiente, 10-15 minutos o hasta que se haya formado un precipitadoblanco. Tomar 5mL y almacenar a 4°C. Tirara el sobrenadante hasta donde sea posible.
5. centrifugar el precipitado a 3000 rpm durante 5 min, al cabo de los cuales decantar rápidamente el tubo decentrífuga para eliminar el sobrenadante.
6. Lavar el precipitado con 20 mL de agua destilada, agitando perfectamente con una varilla de vidrio, para permitir que todas las partículas de la caseína sepongan en contacto con el solvente.
7. Centrifugar nuevamente a 3000rpm durante 5 min y eliminar el sobrenadante.
8. Lavar el precipitado una vez con 10 mL de etano al 75%. Resuspender con la...
Fundamento
En las proteínas, como en los aminoácidos y en cualquier molécula anfotérica, las cargas pueden ser neutralizadas de manera talque la carga neta sea cero. Este proceso se realiza al modificar el pH de medio en el que se encuentren estas moléculas. En el caso especial de las proteínas, se aprovecha esta propiedad parapurificarlas. Si en una mezcla de proteínas se alcanza el punto isoeléctrico de una de ellas, ésta se precipita, mientras que el resto quedan disueltas. La razón es que la composición química de cada proteínaes característica y presenta un número distinto de grupos ionizables que se neutralizan a pH diferente. La caseína es una de las fosfoproteínas de la leche que se precipita a pH de 4.8. Estapropiedad se puede explotar para purificarla simplemente al acidificar el medio.
Procedimiento
1. preparar 300 mL de leche descremada a una concentración de 65 g/L con agua destilada
2. diluir 50 mL de laleche descremada anterior con agua destilada 1:4. Ponerla en un vaso de precipitados de 500 mL y agitar. tomar 5mL y almacenar a 4°C.
3. precipitar la caseína a partir de los 195 mL de la lechediluida titulando hasta alcanzar el pH isoeléctrico de 4.8, con HCl al 2%, midiendo el pH constantemente.
4. Dejar reposar a temperatura ambiente, 10-15 minutos o hasta que se haya formado un precipitadoblanco. Tomar 5mL y almacenar a 4°C. Tirara el sobrenadante hasta donde sea posible.
5. centrifugar el precipitado a 3000 rpm durante 5 min, al cabo de los cuales decantar rápidamente el tubo decentrífuga para eliminar el sobrenadante.
6. Lavar el precipitado con 20 mL de agua destilada, agitando perfectamente con una varilla de vidrio, para permitir que todas las partículas de la caseína sepongan en contacto con el solvente.
7. Centrifugar nuevamente a 3000rpm durante 5 min y eliminar el sobrenadante.
8. Lavar el precipitado una vez con 10 mL de etano al 75%. Resuspender con la...
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