Precipitacion, separación y punto isoelectrico de proteinas

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICAALUMNOS:GENARO SANTAMARIA YAÑEZ, HERNANDEZ JUAREZ LAURA ELENA SECCIÓN:2 PRÁCTICA No: 3 “PRECIPITACION, SEPARACIÓN Y PUNTO ISOELECTRICO DE PROTEÍNAS”

INTRODUCCIÓN: Las proteínas en disolución muestran cambios profundos de su solubilidad en función de 1) el pH, 2) la fuerza iónica 3) laspropiedades dieléctricas del disolvente y 4) la temperatura. El pH al que una proteína muestra un mínimo de solubilidad es su pH isoeléctrico que es aquel valor en el que la molécula no posee carga eléctrica, en estas condiciones no existe repulsión electrostática entre moléculas de proteína vecinas y tienden a coalecer y precipitar.
La capacidad de las sales neutras para influir en la solubilidad de lasproteínas está en función de su fuerza iónica (a medida que la fuerza iónica aumenta la solubilidad de una proteína comienza a disminuir), el efecto de solubilidad por salado esta causado por cambios de la tendencia a la ionización, de los grupos R disociables de la proteína.
Las proteínas son precipitadas de sus soluciones por sales de metales pesados, por combinación del ion metálico con laforma aniónica de la proteína.
 OBJETIVO:
* Conocer el efecto que ejercen algunos factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas.
* Determinar el punto isoeléctrico de la insulina
* Conocer el efecto de sales de metales pesados sobre la solubilidad de proteínas
RESULTADOS:
TABLA 1.1 “SEPARACIÓN DE PROTEINAS POR PRECIPITACIÓN CON SALES (SALTING OUT)”
| BIURET |INTERPRETACIÓN |
FLITRADO 1 | POSITIVO/VIOLETA | Presencia de proteínas y poli péptidos ≥ 3 a. a |
PRECIPITADO 1 | POSITIVO/VIOLETA | Presencia de proteínas y poli péptidos ≥ 3 a. a |
FILTRADO 2 | POSITIVO/VIOLETA | Presencia de proteínas y poli péptidos ≥ 3 a. a |
PRECIPITADO 2 | NEGATIVO/AZUL | No hay presencia de proteínas o aminoácidos ≥ a 3 a. a |

Tabla 1.2 “PRECIPITACIÓN POR EFECTO DELpH Y DISOLVENTES”
TUBO # | 1 | 2 | 3 |
Clara de huevo1:3 (ml) | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
HCl 0.1 N ml | 1 | --- | --- |
NaOH 0.1 ml | --- | 1 | --- |
Regulador de acetatos ml | --- | --- | 1 |
Observaciones | Hay p.p. el bajo pH permite que algunas de las proteínas contenidas en el huevo precipiten por que alcanzan su punto isoeléctrico y por ende su mínimo punto de solubilidad. | No hay p.p.alguno, esto es indicativo de que ninguna de las proteínas del huevo tiene un punto isoeléctrico a pH alcalino, por lo que no precipitan. | Hay precipitado, el regulador de pH permite que algunas proteínas alcancen su punto isoeléctrico, no hay dos fases claras pero se presenta turbidez. |
Etanol 96° ml | 3 | 3 | 3 |
Observaciones | Hay p.p. se alcanza el punto isoeléctrico de una o variasproteínas debido a la modificación de la constante dieléctrica del disolvente, hay turbidez en el agua | No hay p.p. a pesar de la modificación de la constante dieléctrica por la acción del etanol, ninguna proteína tiene un punto isoeléctrico en un pH alcalino. | Hay una turbidez más clara al modificar la constante dieléctrica del disolvente por lo que se piensa hay una mayor precipitación deproteínas que en la prueba sin etanol. |

Tabla 1.3 “PRECIPITACIÓN POR METALES PESADOS”
TUBO # | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Clara de huevo 1:3 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
HgCl2 | | --- | --- | --- | --- | --- |
AgNO3 | --- | | --- | --- | --- | --- |
PbCOO | --- | --- | | --- | --- | --- |
BaCl2 | --- | --- | --- | | --- | --- |
NaCl | --- | --- | --- | --- | | --- |
H2O | --- |...