PRELABORATORIO 6 ENZIMAS DE RESTRICCION
Páginas: 3 (513 palabras)
Publicado: 12 de octubre de 2015
PRELABORATORIO 6
ENZIMAS DE RESTRICCION
1. Enumere los factores que son críticos al trabajar con enzimas de restricción y que pueden afectar la actividad de las mismas.
Pureza del ADN: lareacción de enzimas depende de la pureza, contaminantes como proteínas, fenol cloroformo, etanol EDTA, SDS, altas concentraciones de sal
Temperatura y pH: las enzimas son muy sensibles a la teperatura y pHfrente a su estabilidad y actividad
DNAsa: las DNAsas se degradan en presencia de Mg++
Contaminantes de carga negativa (-)
Grados de metilación: algunas endonucleasas son inhibidas por metilación
DNAcontaminado por otro DNA
Si el DNA esta súper enrollado el lugar de restricción no va a estar accesible para la enzima
Buffer adecuado: este produce y provee el ambiente que necesita la enzima paratrabajar la enzima en condiciones optimas
2. Describa las características de las endonucleasas tipo I y III y de ejemplos.
Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimasque cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir de una secuencia que reconocen.
Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa,para degradar material genético extraño que entre en la célula. Las bacterias tienen la capacidad de metilar su DNA, lo cual sirve para distinguir entre el DNA extraño y el DNA propio. Las enzimas derestricción no pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjero y no el DNA bacterial.
Tipo I y Tipo III:
a. Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación(metilan).
b. Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo.
Las Tipo III cortan de 5-8 bases antes odespués de la secuencia que reconocen.
Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.
3. ¿Cuantas endonucleasas tipo II...
ENZIMAS DE RESTRICCION
1. Enumere los factores que son críticos al trabajar con enzimas de restricción y que pueden afectar la actividad de las mismas.
Pureza del ADN: lareacción de enzimas depende de la pureza, contaminantes como proteínas, fenol cloroformo, etanol EDTA, SDS, altas concentraciones de sal
Temperatura y pH: las enzimas son muy sensibles a la teperatura y pHfrente a su estabilidad y actividad
DNAsa: las DNAsas se degradan en presencia de Mg++
Contaminantes de carga negativa (-)
Grados de metilación: algunas endonucleasas son inhibidas por metilación
DNAcontaminado por otro DNA
Si el DNA esta súper enrollado el lugar de restricción no va a estar accesible para la enzima
Buffer adecuado: este produce y provee el ambiente que necesita la enzima paratrabajar la enzima en condiciones optimas
2. Describa las características de las endonucleasas tipo I y III y de ejemplos.
Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimasque cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir de una secuencia que reconocen.
Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa,para degradar material genético extraño que entre en la célula. Las bacterias tienen la capacidad de metilar su DNA, lo cual sirve para distinguir entre el DNA extraño y el DNA propio. Las enzimas derestricción no pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjero y no el DNA bacterial.
Tipo I y Tipo III:
a. Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación(metilan).
b. Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo.
Las Tipo III cortan de 5-8 bases antes odespués de la secuencia que reconocen.
Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.
3. ¿Cuantas endonucleasas tipo II...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.