PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PARA CULTIVOS IN VITRO CON ÁCIDO 2,4-DICLOROFENOXIACÉTICO COMO REGULADOR DEL

PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PARA CULTIVOS IN VITRO CON ÁCIDO 2,4-DICLOROFENOXIACÉTICO COMO REGULADOR DEL CRECIMIENTO VEGETAL
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Introducción

La propagación de plantas in vitro es una técnica de la biotecnología muy utilizada en cultivos de importancia económica. Las técnicas de propagación in vitro permitecultivar células, tejidos, órganos, semillas, embriones y obtener individuos selectos en forma rápida. Los cultivos son realizados con agentes específicos (hormonas, minerales, vitaminas, fuente de carbono, agente gelificante, agua, etc.) y en condiciones ambientales controladas (temperatura, humedad y luz).1

Los medios nutritivos para el cultivo de células y tejidos vegetales son, en general,menos complejos que los de cultivos microbianos y son formulados en forma más o menos empírica. Si bien se desarrollan periódicamente nuevas fórmulas comerciales, no existe hasta el presente un diseño racional que tenga en cuenta la composición centesimal de la célula vegetal y el conjunto de condiciones que controlan el crecimiento y la diferenciación.2 El medio, que sirve de soporte para elexplanto, puede ser sólido o líquido y está conformado por algún agente gelificante inerte (agar, gelrite, etc.), macro y micronutrientes esenciales para la supervivencia de la planta, nutrientes (carbohidratos, vitaminas), agentes reguladores del crecimiento y hormonas vegetales que ayudarán a obtener una planta, o un órgano, a partir del explanto elegido. Algunos de éstos elementos pueden serreemplazados por mezclas poco definidas en su composición, como jugo de “tomate” y agua de “coco”, que pueden dar buenos resultados y generalmente resultan más económicas.3

La composición mineral se define en forma precisa en cada uno de los medios y está dada tanto por los macroelementos (N, P, K, S, Mg y Ca) como por los microelementos (B, Mn, Zn, Cu, Ni, Co, Mo, Al, I y Fe). Estos nutrientes debenestar en una concentración tal que permita el adecuado crecimiento celular. Los requerimientos de nitrógeno son generalmente provistos por una mezcla de
nitrato y amonio en concentraciones variables entre 3 y 50 mM. Cuando estas fuentes son suplementadas en forma individual se afectan, generalmente en forma negativa, tanto el crecimiento del cultivo como la producción de metabolitos. Pero, dadoque el uso de nitrato exige una mayor demanda energética para la asimilación del nitrógeno si se compara con el amonio, algunos explantos crecen mejor si se les suministra nitrógeno reducido, recomendándose en este caso la adición de un ácido orgánico como el succinato como agente bufferante.2

La naturaleza y concentración de los micronutrientes empleados en los medios de cultivo surgenprincipalmente de resultados empíricos al evaluar la capacidad de cada elemento de afectar el crecimiento. En general el boro, el manganeso, el iodo y el cinc se utilizan en concentraciones variables entre 1 y 100 mM, mientras que el resto de los micronutrientes se agregan en valores inferiores a 0,1 mM. No hay un estudio sistemático de su influencia en el crecimiento y la productividad, aunque existenvarios trabajos puntuales como los referidos a la estimulación de la producción de shikonina al aumentar 30 veces el ión cobre al incremento de la producción de compuestos fenólicos por deficiencia de boro y a la mejor formación y calidad de callos de caña de azúcar al incrementar el calcio y el magnesio. 2

A pesar de que las plantas son organismos autotrófos, es necesario añadir al medio decultivo algunas vitaminas hasta que los cultivos prosperen. Las vitaminas favorecedoras del desarrollo de cultivos in vitro y que se añaden rutinariamente en la mayoría de los medios de cultivo son: tiamina (B ), piridoxina (B6) y ácido nicotínico. Otras vitaminas que suelen ser útiles son ácido pantoténico, biotina, riboflavina (B2), colina, cianocobalamina (B12) y ácido fólico. El ácido...