PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO ESENCIALES Y ENRIQUECIDOS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA DE
CULTIVOS CELULARES

INFORME Nº 4
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO ESENCIALES Y
ENRIQUECIDOS

INTEGRANTES

INSTITUTO

LOPEZ ALFARO EDUARDO
MURILLO LOPEZ BLANCA IVETTE
RAMOS MONJARAZ EDUARDO

POLITECNICO

MARTES 11 DE MARZO DE 2014.

NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE
INGENIERIA CAMPUS GUANAJUATO

TITULO.
“PREPARACIÓN DE MEDIOSDE CULTIVO ESENCIALES Y ENRIQUECIDOS”.

OBJETIVOS.




Aplicar técnicas asépticas en campana de flujo laminar para la preparación de medios de
cultivo.
Conocer el área blanca de un cuarto de cultivos y mantener limpio cada equipo que allí se
localiza.
Conocer el uso de pipas neumáticas y su uso en una campana de cultivos.

ANTECEDENTES.
Un medio de cultivo es una mezcla dedeterminadas sustancias, con o sin gelificación, sobre el
cual o dentro de él crecen lo explantes. Normalmente consiste de sales inorgánicas, una fuente de
energía y de carbono para metabolismo, complementos orgánicos (principalmente vitaminas y
fuente de nitrógeno), reguladores de crecimiento y un gelificante (Berrios and Berthouly,1987).
Un nutriente es una sustancia que necesitan las células pararealizar sus funciones normales:
crecimiento, metabolismo, división celular o diferenciación. Los principales requerimientos
nutritivos de los cultivos celulares son esencialmente los de una célula dentro del organismo:
aminoácidos, purinas y pirimidinas, carbohidratos, lípidos, vitaminas y coenzimas y sales (Morales,
1990).
El medio de composición sencilla MEM diseñado por Eagle, contienelos nutrientes que sólo
permite el crecimiento de células con pocos requerimientos nutritivos (Loyzaga,2006).

DESARROLLO EXPERIMENTAL.
METODOLOGÍA

Lavar con etanol al 70% y
agua estéril los reactivos
que se ingresaran al
cuartode cultivo.

Colocarse el cubrebocas,
guantes y asegurarse la
bata.

Desinfectar muy bien las
campanas de flujo con
etanol al 70% y prender el
extractorIngresar con precausión los
contenedores de los reactivos a
la camapana de flujo laimnar y
delimitar tres espaciós.

Designar un espacio para
material que ingresa, otro para
meterial utilizado y otro para
preparar el medio.

Ingresar a la campana según el
espacio designado, las pipetas
estériles, el pipeteador
automatico, la micropipeta, las
puntas y el frasco estéril.

Abrircon mucho cuidado cada
uno de los reactivos sin retirar
completamente la tapa, hasta
el momento de su utilización

Agregar 2.23 mL de suero
fetal de cabra

Agregar 0.23mL de
aminoácidos no esenciales
100X

Agregar 0.23 mL de MEM
piruvato de sodio 100mM

Agregar 0.23 mL antibiotico
penicilina/estreptomicina
100µg/mL.

Agitar suavemente y tomar
una alícuota de 100µL paradeterminación de pH final

Verificar que tenga un pH
final entre 7.2 y 7.4

Cerrar el frasco con
precausión y sellar con
papel parafilm

Etiquetar el frasco con
fecha, hora, tipo de medio e
integrantes del equipo

Guardar en el
refrigerador a 4°C

DISCUSION DE RESULTADOS.
Para preparar la zona de trabajo, es necesario encender el extractor y desinfectar con etanol al
70% todo el interiorde la campana de flujo laminar, posteriormente se enciende la luz UV y se
abandona el cuarto de cultivo durante un tiempo de 15 minutos; la radiación UV altera las
secuencias de ARN y ADN de los microorganismos que aun puedan estar presentes, evitando así su
crecimiento, reproducción y sobrevivencia.
Una vez lista el área de trabajo, se preparó un medio de cultivo enriquecido empleando lassiguientes cantidades de reactivos (ver tabla 1).
Tabla 1. Componentes del medio de cultivo
Componente
Medio de cultivo DMEM
Suero fetal de cabra
MEM aminoácidos no esenciales 100X
MEM piruvato de sodio
Solución penicilina/estreptomicina (100 µg/mL)
Volumen total del medio

Cantidad
20
2300
230
230
230
22.99

Unidad
mL
µL
µL
µL
µL
mL

El pH final del medio se determinó...