Preparación De Medios De Cultivo Microbiológicos Complejos, Selectivos y Diferenciales y Esterilización.

ITESM Campus Toluca
Laboratorio de Microbiología

Preparación de medios de cultivo microbiológicos complejos, selectivos y diferenciales y Esterilización.

* Resumen
Esta práctica se basó en la preparación de cultivos microbiológicos comerciales (complejos, diferenciales y selectivos), y en su posterior esterilización para poder ser utilizados en la siembra de muestras de alimentos. Supreparación en general consistió en agregar la cantidad necesaria de medio de cultivo comercial (Agar Nutritivo, Agar MacConkey y Agar BHI) a 45 mL de agua deionizada para llenar tres platos de Petri, se calentó el agua hasta que hirviera para poder disolver el medio, se cerró el recipiente y se dejó esterilizar de 15 a 20 minutos en el autoclave, una vez esterilizado se siguieron las técnicasasépticas para el llenado de los platos de petri, finalmente estos se guardaron en el refrigerador. Aunque los cálculos para la cantidad de medio fueron realizados de manera correcta, la cantidad de agua deionizada empleada resultó ser insuficiente para tres platos de Petri, por lo que algunos no fueron llenados o sólo tenían una capa delgada del medio. Es importante llevar a cabo la preparación demedio de la mejor manera y considerando siempre medidas de esterilidad, pues para poder sembrar y observar resultados concisos, no debemos cometer errores en la cantidad de medio de cada caja de Petri y su esterilidad.

Palabras clave: Medios de Cultivo, Esterilidad, Autoclave, Agua deionizada.

* Introducción

Un medio de cultivo es el conjunto de nutrientes que crean las condicionesnecesarias para el desarrollo óptimo de microorganismos. Debido a que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivos también es amplia y por lo tanto no se puede hablar de un medio de cultivo universal y en consecuencia se debe tener cuidado en la selección del medio de cultivo que se va a utilizar. En general sabemos que existen diferentes medios decultivo, de acuerdo a su composición física: medios líquidos, sólidos y semisólidos; y de acuerdo a su composición química: medios definidos, complejos, de enriquecimiento, diferenciales y selectivos. (Brock, 2009)
Algunos de los constituyentes principales de los medios de cultivo son:
* Fuente de carbono y sales: en muchos medios se utiliza la lactosa, dextrosa como fuente de carbono, en algunoscasos se complementan con sales como NaCl o diversos fosfatos, magnesio, amonio, etc.
* Extractos: en ocasiones ciertos órganos o tejidos de animales son deshidratados hasta tener una pasta o polvo, suelen utilizarse pues representan una fuente rica de factores de crecimiento y vitaminas, algunos ejemplos son los extractos de carne y de levaduras.
* Peptonas: son mezclas complejas decompuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales que se obtienen por digestión enzimática de proteínas animales o vegetales. Son ricas en aminoácidos pero deficientes en determinadas vitaminas y sales, los ejemplos más comunes son la caseína y la soja.
* Fluidos corporales: sangre, plasma o suero son algunos ejemplos de fluidos corporales utilizados en los medios de cultivo, son ricos enfactores de crecimiento y pueden neutralizar inhibidores de crecimiento de ciertas bacterias. Es importante mencionar que la sangre no se puede esterilizar y por lo tanto debe ser obtenida en condiciones asépticas directamente del animal sano.
* Buffers o soluciones amortiguadoras: mantienen el pH dentro del rango óptimo de crecimiento.
* Agentes selectivos: cristal violeta, sales biliares yantibióticos, suelen ser adicionados a los medios de cultivo para inhibir el crecimiento de microorganismos no deseados.
* Agar: es el agente gelificante en medios sólidos, se obtiene de algas marinas, se disuelve a 100°C y solidifica a 40°C aproximadamente. No representa un nutriente.
(Gamazo, 2005)

A continuación se mencionan diversos medios de cultivo de interés para esta práctica y su...