Preparacion de medios de cultivo para induccion de callos

INTRODUCCIONEl éxito del empleo del cultivo de tejidos vegetales in vitro, está muy influenciado por la composición química del medio de cultivo y los factores ambientales (Gamborg, 1984; López, 1990). Si falta algún componente básico en el medio de cultivo, lo normal es que no se produzca crecimiento y desarrollo y el tejido u órgano muera. En el uso de las técnicas in vitro en las plantassuperiores, los reguladores del crecimiento, especialmente las auxinas y citocininas, juegan un papel muy importante (Pierik, 1990).
Para establecer un sistema artificial de cultivo de tejidos vegetales, se debe elaborar un medio de cultivo que se ajuste a los principios requeridos nutricionalmente por la especie vegetal y tipo de explante empleado (Szabados et al., 1993; Molina et al., 2003).Las auxinas, generalmente, producen elongación y abajas concentraciones predomina la formación de raíces adventicias; mientras que, con altas concentraciones no se producen raíces y tiene lugar, en cambio, la formación de callos (Margara, 1988). Por otro lado, las giberelinas inducen la elongación de los entrenudos y el crecimiento de los meristemos aislados o yemas in vitro, pueden romper ladormancia de losembriones y generalmente inhiben la formación de raíces y vástagos adventicios. Según Parrot (2002), cuando el nivel de auxinas en el medio de cultivo baja más de cierto umbral, las células embriogénicas comienzan un proceso de histodiferenciación.
Una de las técnicas de la propagación in vitro es el cultivo de callo. Un callo es una masa de células más o menos organizada queusualmente se origina como resultado de heridas en órganos y tejidos ya diferenciados, por tanto, un callo no es homogéneo sino que por el contrario, está formado por células diferenciadas e indiferenciadas1.
La formación del callo depende del tipo de regulador del crecimiento y su concentración en el medio depende del genotipo y del contenido endógeno de hormonas del explante, siendo necesarioaportar, según el caso, sólo auxinas, sólo citoquininas o ambas. Las auxinas, en concentraciones moderadas a altas son las más usadas para la formación de callos, entre ellas, la más utilizada es el 2,4-D. Una alta concentración de auxina y baja de citoquinina en el medio promueve la proliferación celular en algunas especies, con la consecuente formación de callo. Las citoquininas más utilizadasson la kinetina (Kin) y la benciladenina (BA) y dentro de las auxinas, las más empleadas son ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), ácido naftalenacético (ANA) y ácido indolacético (AIA)1.
También son igualmente importantes otros factores para la formación de callos, entre ellos, el tipo de material del que proviene el explante (juvenil o adulto) y la posición original de este en la plantadonante, así como también el genotipo, la composición del medio nutritivo y los factores físicos como luz, temperatura, etc.)2.
El presente trabajo tiene como objetivo principal conocer la elaboración de medio de cultivo para la inducción de callos.
II. MATERIAL Y MÉTODOS
La práctica tuvo lugar en el laboratorio del cuarto piso de Biología celular y molecular de la Facultad de CienciasBiológicas, Escuela de Biología perteneciente a la Universidad Nacional de Trujillo. Para la preparación de 150 ml de medio M, S, 1962 para la mesa designada (Mesa N° 2) se utilizaron los siguientes componentes:
PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO M.S
FLUJO ml gr.
1 MS 10X 15 ml -
A % 3 % - 4.5 g
2, 4 - D 3 ml -
AGAR 0,8 % - 1,2 g
AGUA DESTILADA (Q.P) 150 ml -
4251325956554Material Utilizado00Material Utilizado
38013541153893
Preparación De Medio De Cultivo. Se utilizó el medio basal de Murashigue y Skoog suplementado con la hormona 2,4 -D, Sacarosa al 3%, agar al 0.8%.
El procedimiento a seguir fue el siguiente:
En una probeta con capacidad de 250 ml, se agrega con la ayuda de una pipeta de caída libre 50 ml de agua destilada más 15 ml MS 10x (Medio concentrado ya preparado)....