Preparacion de soluciones madre 06 07 1

PRÁCTICAS DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRE PARA LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. INTRODUCCIÓN
Son muchos los componentes de un medio para cultivar material vegetal "in vitro":
Sales minerales que incluyan todos los elementos esenciales tanto micro como macronutrientes
Vitaminas tales como Riboflavina, tiamina, piridoxina, ácido nicotínico, ácido pantoténico, biotina, y ácidofólico.
Aminoácidos tales como L-glutamina, asparragina y cisteína
Hexitoles como mio-inositol
Hormonas y reguladores del crecimiento
Fuente de carbono
Agente gelificante
...
Un método de hacer menos tedioso el trabajo consiste en preparar lo que se conoce como "soluciones madre" de algunos de estos componentes. Estas soluciones tienen una concentración que suele ser 10, 100 e incluso 1000 vecessuperior a la concentración final del medio. Su ventaja no estriba sólo en el hecho de que hay que pesar menos veces cada vez que se prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que algunos compuestos están tan diluidos en la solución final, que la pesada que habría que hacer estaría por debajo de los límites de exactitud de las balanzas de precisión.
Las soluciones madre se conservanen frigorífico y en bote topacio durante algunos meses, desechándose ante cualquier señal de precipitación.
Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los aminoácidos, hormonas, vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono y el agente gelificante se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades muy elevadas y no se conservan bién en solución.
En el caso de lashormonas es mejor preparar una solución madre de cada una de ellas y medir volúmenes determinados y congelarlos en un frigorífico de 4 estrellas.
2. OBJETIVO.
Preparar soluciones madre necesarias para la composición de los medios de cultivo que se emplearán en el conjunto de las prácticas de la asignatura.
3. MATERIAL
Botes de cristal o de plástico (preferiblemente de los primeros por sutransparencia), que en algunos casos habrán de ser de color topacio para proteger de la luz determinados compuestos que son fotosensibles
Granatario
Balanza de precisión
Espátulas de distinto tamaño para pesar
Embudos de pesar
Agitador magnético
Imanes
Vasos de precipitados
Probetas
Matraces aforados
Eppendorf
Compuestos químicos
Agua destilada
4. METODOLOGÍA
Se prepararán soluciones madre de las salesminerales, vitaminas, aminoácidos y hormonas necesarias para los medios DKW y MS. Veamos la composición de cada uno de ellos:



















Lo más normal es preparar soluciones que contengan varios componentes, de modo que la preparación de la solución final sea más rápida y tenga menos margen de error.
Veamos la composición de cada una de las soluciones madre de ambos mediosSe establecerán 8 equipos de trabajo por cada grupo de prácticas (2 en cada lateral de una mesa).
Normas generales a la hora de pesar
Comprobar los cálculos. Y tener en cuenta que los valores de las soluciones madre están expresados para un litro
Leer las características del reactivo que se va a pesar. Algunos son tóxicos por inhalación o en contacto con la piel y hay quemantener las debidas precauciones.
Desde 0.01 g se utilizará el granatario. Para valores inferiores la balanza de precisión.
Antes de pesar hay que tarar el recipiente donde se está haciendo la pesada. Nunca se debe pesar directamente sobre el platillo de la balanza.
Antes de introducir la cucharilla de pesar en un frasco de reactivo hay que asegurarse de que esté limpia y seca. Es una precaución queevita la contaminación de los reactivos
Hay que tener la precaución de tomar del frasco de reactivo muy poca cantidad de modo que en la medida de lo posible se evite devolver al frasco parte de lo que se tomó.
Normas generales a la hora de preparar las disoluciones
Si la disolución se va a remover con un agitador mecánico el mejor recipiente es un vaso de precipitados. Si la agitación es manual,...