PREPARACION Y ESTABLECIMIENTO DE MERISTEMOS SECUNDARIOS DE ZANAHORIA

PREPARACIÓN Y ESTABLECIMIENTO DE MERISTEMOS SECUNDARIOS DE ZANAHORIA


BONILLA JENNIFFER
1610364
RANGEL MARLON
1610521
OCAMPO ISABEL
1610364



INFORME DE LABORATORIO BIOTECNOLOGIA VEGETAL



ING. AGRONOMA SIGARROA RIECHE ALINA KAFIL



UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER
INGENIERIA BIOTECNOLOGICA
SAN JOSE DE CUCUTA
2015

Introducción
La organogénesis es el proceso de regeneración queocurre mediante la formación de órganos nuevos como vástagos, raíces, flores, hojas, etc. Puede ser directa que se utiliza para la micropropagación de plantas e indirecta con formación de callo.
El callo es un tejido no organizado y poco diferenciado formado por células en proliferación que se producen tanto in vivo como in vitro. Los callos in vitro en general se forman a partir de explantescultivados en presencia de altas concentraciones de auxinas.
La organogénesis indirecta tiene interés en programas de selección en los que se requiere variabilidad genética adicional a la ya existente en la naturaleza como por ejemplo la resistencia a antibióticos, herbicidas, sequia, etc.
Existen varios factores que deben ser considerados para la manipulación exitosa de la organogénesis. Entre ellosse mencionan el tamaño y la edad fisiológica de los explantes, pues se ha comprobado que los tejidos juveniles presentan una mayor capacidad para la organogénesis que los tejidos provenientes de órganos adultos o senescentes.
También la temperatura, luz, consistencia del medio de cultivo, pH y reguladores de crecimiento desempeñan un papel fundamental en el desarrollo de la respuesta organogénica.(Chandra et al, 2003).







Objetivos
Desarrollar habilidades en el trabajo de cultivo de tejidos.
Dominar la técnica de aislamiento, desinfección y establecimiento de meristemos secundarios de zanahoria.





















Materiales
Hipoclorito de sodio
Probetas de 25 ml, 250 ml
Alcohol 70%
Frascos de vidrio estériles
Beakers de 250 ml
Frascos de agua destilada estéril
Detergente
Medios decultivo preparados
Instrumentos de disección (pinzas, escalpelos, agujas, etc (juegos estériles)
Papel aluminio
Enlermeyer de 100 ml
Bureta graduada
Pipeta de 1 ml
Almidón de 1%
Ki
Tiosulfato de sodio al 0.1 N.
Ácido acético glacial o ácido sulfúrico al 0.5 N

Metodología
Valoración de hipoclorito
En un Erlenmeyer de 100 ml adicionar 20 m de agua destilada, 1 ml del hipoclorito a valorar y 1 g deKI, mezclar (color yodado), añadir 5 ml de ácido acético glacial o ácido sulfúrico 0.5 N, agitar valorar con el tiosulfato hasta color amarillo claro, añadir 2 gotas de almidón 1 % (color violeta), seguir valorando hasta el viraje incoloro.
La concentración de hipoclorito de sodio se halla según la fórmula:
% de hipoclorito = vol gastado * 0.376
% de hipoclorito = 16.3 ml * 0.376
% de hipoclorito=6.12% Hipoclorito Real
Valoración del alcohol
Se pesó una probeta de 10 ml vacía, se adiciono 10 ml de alcohol, se pesó nuevamente, la diferencia de pesos indico la masa del alcohol, teniendo la masa y el volumen se halló la densidad según la fórmula:

Buscando en la tabla de Merck se determinó la concentración del alcohol = 99%
Soluciones desinfectantes:
* 100 ml de solución jabonosa: en 100ml de agua destilada se agregó detergente y agitamos.
* 300 ml de solución de alcohol al 70%
V1 C1 =V2 C2 𝑉1 =
V1 : cantidad de alcohol que debo adicionar
C1 : concentración a la que está el alcohol
V2 : volumen que deseo preparar de alcohol
C2 : concentración de alcohol a la que quiero llegar
V1 =
* 100 ml de solución de hipoclorito al 5%
* 100 ml de solución de hipoclorito al 10%
V1 C1 =V2C2 𝑉1 =
V1 : cantidad de hipoclorito que debo adicionar
C1 : concentración a la que está el hipoclorito
V2 : volumen que deseo preparar de hipoclorito
C2 : concentración de hipoclorito a la que quiero llegar
V1 =
PROCESO DE PRE DESINFECCIÓN Y DESINFECCIÓN PARA MERISTEMOS SECUNDARIOS DE ZANAHORIA

Análisis y Discusiones de Resultados
Se sembraron 21 explantes de zanahoria en un medio de...