preparacion y esterilizacion de medio MS

PRACTICA No. 3 “Preparación y esterilización del medio de cultivo MS”
Objetivo:
El alumno aprenda a preparar y esterilizar el medio de cultivo MS. Así como a utilizar y esterilizar todos los instrumentos necesarios para el cultivo de tejidos mediante la realización de una práctica en laboratorio de biotecnología vegetal.
Justificación:
Es importante realizar esta práctica, teniendo cuidado deelaborar la solución con exactitud para facilitar el crecimiento de microorganismos. Así mismo, para aprender a prepararla y esterilizar esta MS.
Introducción:
El medio de cultivo que se emplea en la propagación in- vitro de tejidos vegetales es rico en nutrientes lo cual facilita el crecimiento de microorganismos. Es por esto que antes de cualquier órgano, tejido o semilla de una planta se ahsembrado en un medio de cultivo, este debe ser desinfectado para eliminar los microorganismos que pudiera tener.
Existen varios métodos por medio de los cuales los contenedores, materiales y instrumentos y medios de cultivo usados en cultivos vegetales pueden ser esterilizados
1. Destrucción física de microorganismos por calor húmedo a presión (autoclave).
2. Eliminación de microorganismospor filtración.
3. Calor seco
Generalmente la esterilización del medio de cultivo, cristalería e instrumentos se lleva a cabo en la autoclave. El tiempo de esterilización empleado es de 15 minutos a una presión de 15 lb/pul2 (1kg./cm2) y una temperatura de 120-121°C
Estas soluciones tienen una concentración que suele ser de 10, 100 e incluso 1000 veces superior a la concentración final delmedio. Su ventaja no estriba solo en el hecho de que hay que pesar menos veces cada vez que se prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que algunos compuestos están diluidos en la solución final, que la pesada que habría que hacer estaría por debajo de los límites de exactitud de las balanzas de precisión. Las soluciones madre se conservan en frigorífico y en bote topacio durantealgunos meses, desechándose ante cualquier señal de precipitación.

Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales. Aminoácidos, hormonas, vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono y el agente gelificante se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades muy elevadas y no se conservan bien en solución; en el caso de las hormonas es mejor preparar una solución madre decada una de ellas y medir volúmenes determinados y congelarlos en frigoríficos de 4 estrellas
Las soluciones deben prepararse con mucho cuidado y precisión. Las sales deben pesarse en una balanza granataria (precisión= 0.01 g) y en la balanza analítica se pesaran las vitaminas y reguladores de crecimiento (precisión = 0.0001 g).La conservación de las soluciones madres se hará de 4-5 C. en elrefrigerador, es recomendable no prolongar por más de tres meses la conservación de las soluciones madres de sales minerales. Las que contengan vitaminas y sustancia de crecimiento estables podrán conservarse un máximo de 4 semanas.

Material:
3 Pipetas de 10 ml
1 vaso de precipitado de 1000 ml
1 probeta de 500 ml y una de 1000 ml
1 probeta de 250 ml
1 Pizeta con agua biodestilada
4 pipetaspasteur
4 Cajas petri
1 estuche de disección
Papel absorbente
7 matraz Erlenmeyer de 250 ml
7 matraz volumétrico de 250 ml
Cinta más King
Marcador de tinta indeleble
1 espátula
4 frascos de alimento infantil con tapa
1 magneto agitador
Papel envoltura
Equipo:
Autoclave
Pm-metro
Balanza gran ataría
Balanza analítica
Horno de microondas
Plato agitador magnético
Aparato de filtracióndesechable
Soluciones y reactivos:
Nitrato de amonio
Nitrato de potasio
Sulfato de magnesio
Sulfato manganoso
Sulfato de zinc
Sulfato cúprico
Cloruro de calcio
Yoduro de potasio
Cloruro de cobalto
Fosfato de potasio
Ácido bórico
Molibdato de sodio
Sulfato ferroso
Etilendinitrilotetracetatodisodico (sal disódica)
Tiamina
Azúcar
Hidróxido de sodio
Ácido clorhídrico
Etanol...