Preparaciones en frescos y temporales

FECHA: 23/11/13
OBJETIVOS
Al finalizar la práctica el alumno:
Aprenderá a montar preparaciones temporales y permanentes.
Diferenciará entre una preparación temporal y permanente.

INTRODUCCIÓN
Para poder observar al microscopio células, tejidos animales o vegetales y microrganismos es necesario hacer preparaciones sobre portaobjetos.
Una preparación microscópica se define como elresultado de una serie de operaciones destinada a colocar material de observación en una capa de poco espesor, lo más pequeña y representativa; sobre una superficie de vidrio transparente (portaobjetos), cubierta con una más delgada (cubre objetos).
Los portaobjetos son de vidrio lo más transparentes posibles de un espesor aproximado de 2 mm y de unas medidas estándar de 16 x 26 mm. Los bordes puedenser o no esmerilados, y algunos tiene una concavidad en el centro para recibir gotas de líquido con muestras para su estudio.
Los cubre objetos son de diversos tamaños, los habituales son de 18 x 18 mm, 20 x 20 mm y 22 x 32 mm de forma diversa. Los más comunes son cuadrangulares y su espesor aproximado es de 0.25 mm.
Las preparaciones biológicas pueden ser temporales o permanentes.Preparaciones temporales.
Estas preparaciones pueden ser frescas o con material fijado o muerto. En las preparaciones frescas se usa una porción de material vivo, ya sea animal o vegetal, o una gota con microrganismos ya que la muestra se examina directamente, sin modificar o , como mucho, se diluye o concentra. Las preparaciones frescas se usan solo durante la práctica, o sea un tiempo no mayor a una horaya que el calor desprendido por la fuente de iluminación evapora rápidamente el líquido que contiene.
El medio a emplear puede ser líquido (agua, agua-glicerina). Recuerde que siempre hay que depositar un líquido sobre la porta objetos que reciba a la muestra biológica.
Una preparación temporal pero de mayor duración puede llevarse a cabo usando como medio de montaje gelatina-glicerina, bálsamode Canadá, y es conveniente cubrir alrededor de los bordes del cubreobjetos con una pequeña porción de vaselina sólida, parafina o barniz transparente esto actuará como sello para impedir la deshidratación.
Presentan las ventajas siguientes:
Algunos elementos que queremos observar (microrganismos, células humana, cristales, etc.) se observan suficientemente bien en fresco, ya sea utilizando elmicroscopio de campo claro o el de contraste de fases.
Permiten observar la movilidad de los microrganismos vivos, dato que en ocasiones tiene interés analítico.
Algunas son preparaciones que se elaboran de forma rápida, simple y económica.
Sus inconvenientes son estos:
No tiene validez universal: muchos microrganismos no son observables de este modo.

PREPARACIONES EN FRESCO LIGERAMENTEMODIFICADAS.
Nos referimos a preparaciones en fresco en las que a la muestra se agrega una sustancia que facilita o mejora la observación de los microrganismos.
Tiene por objeto poner de relieve detalles estructurales o de movilidad de los microrganismos que no es posible observar en fresco ni tras realizar modificaciones físicas y químicas profundas, como sucede con la fijación seguida de tinción.Se prepara del mismo modo que un montaje húmedo, pero antes de cubrir la gota de muestra con el cubreobjetos se agrega una gota de un colorante que no mate a los microrganismos, se mezcla con el asa y se cubre con el cubreobjetos. Los microrganismos que nos interesa observar absorberán el colorante más que el medio y que los otros elementos formes (si el colorante esta bien elegido)
Alobservarlos en campo claro absorberán mas la luz y aparecerán coloreados más intensamente que otros elementos formes y que el medio que los rodea.
Los colorantes usados suelen ser los mismos que se utilizan para las tinciones simples aunque muy diluidos (diluciones de 1/10.000).
Esto se hace porque los colorantes son tóxicos para las células. La superior dilución disminuye su toxicidad y esto permite...