presentacion cruzada

Tema 19. Anticuerpos Monoclonales y Policlonales.
Producción y Purificación. Aplicaciones

Concepto de suero policlonal y monoclonal
Cuando se inocula un antígeno (o penetra un patógeno) se produce una respuesta de
anticuerpos frente a cada uno de los determinantes antigénicos (epitopos) del antígeno.
Todos los anticuerpos se producen de forma simultánea, todos reaccionan con el antígeno,pero solo con un determinante concreto. Esto es lo que se produce en la respuesta inmune
normal, y a esta mezcla de anticuerpos es a la que se denomina suero Policlonal, porque
procede de varios linfocitos B que se expandieron (tras reconocer al antígeno) produciendo
cada uno un clon celular.
En cambio si la inoculación o inmunización la realizásemos con un antígeno que contuviese
un únicoepitopo, solo se activaría un clon celular y se produciría un único anticuerpo. A un
suero que tuviese estas características se le denomina suero monoclonal. Esta situación, no
se produce en condiciones normales, pero en determinadas condiciones patológicas
aparecen neoplasias de células B y de los plasmocitos derivados de ellas (Mieloma
múltiple). Como son células productoras de anticuerpos,estos se acumulan en la sangre en
grandes cantidades. Como ocurre en todos los procesos tumorales el origen está en una
célula que se maligniza y se multiplica de forma autónoma e independiente de los sistemas
de regulación del organismo, lo que es lo mismo que decir que todas las células del
mieloma proceden de una misma célula y, por tanto, producen el mismo anticuerpo.
Aunque existenmielomas de cada una de las cinco clases de inmunoglobulinas los más
frecuentes producen los isotipos IgA e IgG.
Producción de anticuerpos
A partir de un suero policlonal se puede obtener un suero especifico para el antígeno
mediante aislamiento y purificación. Si bien los anticuerpos obtenidos, todos ellos
especificos para el antígeno, variaran en su afinidad para el mismo al proceder de distintosclones. Este seria un suero, por tanto, policlonal. La Técnica básicamente consiste en
efectuar una cromatografía de afinidad en columna. En esta técnica se une el mismo
antígeno que se utilizó para la inoculación a unas bolitas especialmente preparadas para que
lo capturen. Una vez recubiertas por el antígeno se “empaquetan” las bolitas en un tubo fino
(se le llama “columna”) y se hace pasarpor el al suero que se desea purificar. Los
anticuerpos específicos para el antígeno retenido sobre las bolitas se unen a el y el resto de
los anticuerpos y proteínas del suero sale por la parte inferior. El paso final es la ruptura de
las uniones entre antígeno y anticuerpos (cosa que se hace añadiendo a la columna una
solución hipertónica u otra con pH ácido, con lo que los anticuerposespecíficos se eluyen
(salen) por la parte inferior.
Obtención de anticuerpos monoclonales
En 1975 Kohler y Milstein desarrollaron la técnica de los hibridomas, mediante la que
pueden producirse en el laboratorio anticuerpos monoclonales específicos para un antígeno

(determinante antigénico) concreto. La técnica se desarrolló inicialmente utilizando células
de ratón, pero en la actualidad seproducen hibridomas a partir de células de varias
especies, incluyendo la humana.
Fusión.
La técnica consiste básicamente en fusionar células linfoides (productoras de anticuerpos)
con células de mieloma (tumorales) en presencia de poli-etilen-glicol (PEG), que provoca
la fusión de las membranas y la formación de híbridos celulares. Las células productoras
del anticuerpo se obtienen a partirde los órganos linfoides periféricos (bazo y/o ganglios
linfáticos) de animales hiper-inmunizados con un antígeno o patógeno concreto. Las células
de mieloma a utilizar deben reunir, al menos, las siguientes características:
•
Ser histocompatibles con las células productoras de anticuerpos
•
No secretar inmunoglobulinas
•
No tener la enzima hipoxantina-guanina-fosforribosil-transferasa...