Presentacion tesis maestria

UNIDAD DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO DE ALIMENTOS

UNIDA
CULMINACIÓN DE MAESTRIA ANÁLISIS GENÉTICO DE ENZIMAS PRODUCIDAS POR Trichoderma spp. EN EL MICOPARASITISMO SIMULADO SOBRE HONGOS FITOPATOGENOS.

PRESENTA IBQ. Ernesto Alejandro Zavala González

ASESOR Dr. Mario Ramírez Lepe Dra. Rosa Maria Oliart Ross

Veracruz, Ver abril 2010

Introducción

Pertenece a la subdivisiónDeuteromycetes. Se han agrupado más de 33 especies. Los cultivos en placas toman un color verde , blanco o amarillo.  Produce una gran cantidad de enzimas, inducibles con la presencia de hongos fitopatógenos.

Ramas de conidióforos de Trichoderma harzianum

Introducción

 Antibiosis.  Competividad por nutrientes.  Inducción de la resistencia de

plantas.
 Micoparasitismo:Reconocimiento e Invasión Penetración de la Hifa Secreción de Enzimas Hidrolíticas

Micrografía electrónica del daño de la pared celular de Phytium spp. y Rhizoctonia solani ocasionado por Trichoderma harzianum.

(Hubbard et al., 1983).

Introducción

TIPO DE ACCION

ENZIMA
CHIT72 CHIT73 CHIT42 CHIT33 CHIT36

REFERENCIA
Lorito et al. (1994) Haran et al. (1995) Ulhoa et al. (1992) De la Cruzet al. (1993)

PATÓGENO

GEN
nag1 exc1 ThEn-42 chit33 Chit36 Tv-ech1, Tv-ech2, Tv-ech3 bgn13.1 gluc78

REFERENCIA
Peterbauer et al.(1996) Draborg et al. (1995) Hayes et al. (1994) Limon et al, (1995) Viterbo et al. (2001) Dong-Jin Kim et al. (2002).

Botrytis cinerea

Quitinasas

R. Solani

β-1-3-glucanasas

BGN13.1 GLUC78 GLU36 LAM1.3 TVBGN1 TVBGN2

De la Cruz et al. (1995)Lorito et al. (1994) Noronha et al. (2000) Bara et al. (2003) Kim et al. (2002) De la Cruz et al. (1995) Llobell et al. (1999) Montero et al. (2000) Ait-Lahsen et al. (2001) Wong et al. (1992)

S. Rolfsii y B. cinérea

De la Cruz et al. (1995) Donzelli et al. (2001)

lam1.3
Tv-bgn1 Tv-bgn2 B. cinérea

Cohen-Kupiec et al. (1999) Kim et al. (2002)

β-1-6-glucanasas

BGN16.1 BGN16.2BGN16.3 AGN13.1

α-1,3-glucanasas Xilanasas Proteasas Lipasas

Prb1 TVSP1

Benitez et al. (1998). Kashmiri et al. (2006).

Crinipellis perniciosa

tvsp1

Pozo et al. (2005)

Antecedentes
Irina S. Druzhinina et al 2005. Determinaron un método para la rápida identificación molecular de Hypocrea / Trichoderma a nivel de genero y especie, basándose en un código de barras deoligonucleótidos (hallmarks).

Antecedentes
Donzelli et al 2001. El análisis Northern indica que el gen es expresado en medios con 0.1% de glucosa,0.1% de laminarina, después de las 18 y es reprimido en presencia de 3% de glucosa.

Análisis Northern de la expresión de gluc87 de T.atroviride (A) expresión de gluc 87 durante la interacción de Trichoderma con otros hongos en PDA:T/T, Trichoderma-Trichoderma;R/R, Rhizoctonia-Rhizoctonia; P/P, Pythium-Pythium; T/R, Trichoderma-Rhizoctonia; T/P, Trichoderma-Pythium; 1/8 de longitud de PDA: T/T8, Trichoderma-Trichoderma; T/R8, Trichoderma-Rhizoctonia; T/P8, Trichoderma-Phythium.

Antecedentes
Dong-jin Kim et al 2002. Reportan la caracterización de un set de 3 genes de endoquitinasas de 42 Kd, dos exoquitinasas de 33 Kd con homología aN-acetylglucosaminidasas de T. virens utilizando glucosa, quitina y pared celular de Rhizoctonia como fuente de carbono.

Analisis Nothern blot de glycosil chitinasas. El gel muestra el ARN total aislado 24h después de suplementar el medio Voguel´s con o.5% de glucosa, 0.0% de glucosa, 0.5% de quitina coloidal, q% de pared celular de Rhizoctonia como fuente de carbono.

Antecedentes
Peterbauer et al1996. Determinaron la expresión del gen nag1 (N-acetyl-β-D-glucosaminidasa) utilizando la pared celular de Botrytis cinerea como única fuente de carbono.

a

b

Regulación de nag1 (a) Hibridación Northern de RNA total de T.harzianum después de 2 días en medio suplementado con Pared celular de B.cinerea(1), quitina coloidal(2), glucosa (3), lactosa (4) y N-acetylglucosamina (5a; a 12h de...