principios basicos de citometria

CITOMETRÍA DE FLUJO
Principios Básicos de la Citometría de Flujo
La citometría de flujo es el análisis de las características de las células que pasan una a una en una suspensión líquida a travésde un haz de luz. La luz esparcida y la intensidad de la fluorescencia se miden por un conjunto de fotodiodos. Los datos coleccionados por estos fotodiodos se transmiten a la computadora para suprocesamiento subsecuente y la producción de datos. Los componentes básicos de un citómetro de flujo son el sistema líquido, el sistema óptico, el sistema detector de señal, y el sistema de manejo dedatos.
El sistema líquido tiene la responsabilidad del movimiento de la muestra a través de la cámara de flujo desde su aparición hasta su descarte como desecho. Mediante enfoque hidrodinámico se creauna suspensión de células simples dentro de la vaina líquida. Al aspirarse la muestra una presión diferencial entre el flujo de la muestra y el flujo de la vaina líquida crea una corriente central conla muestra rodeada por la vaina líquida (flujo laminar) y evita la mezcla de la muestra con el líquido de la vaina. Las células pasan a través del haz láser en fila única a una velocidad de 5000células por segundo.

En el laboratorio clínico la fuente de luz comúnmente usada para citometría de flujo es el láser de ión argón. Las características importantes de la luz láser son su alta radiación,estabilidad y pureza espectral. La ventaja de la luz láser es la capacidad de enfocar el haz de luz monocromática en un área igual a las dimensiones de la célula. El enfoque del láser se logra por unaserie de lentes que dan forma al haz. Al pasar la célula a través del haz láser, dispersa la luz y los fluorocromos la absorben y la emiten nuevamente a una longitud de onda distinta (fluorescencia).La luz se esparce en ángulos diferentes; la dispersión hacia delante (ángulo bajo) define el tamaño de la célula, y la lateral (ángulo de 90°) la granularidad o estructura nuclear. La intensidad...