PROCEDIMIENTO DE AISLAMIENTO DE ADN DE SANGRE PERIFERICA

PROCEDIMIENTO DE AISLAMIENTO DE ADN DE SANGRE PERIFERICA

1. Recepción y toma de muestras
Todas las muestras que se procesan deben ser manejadas como potencialmente infecciosas.
2.Procedimiento de aislamiento de ADN
Sacar de la nevera unos 30 minutos antes de iniciar el procedimiento los viales que contienen buffer de lisis de Glóbulos Rojos, para que adquieran la temperatura ambiente.Marcar 2 tubos eppendorf de 2ml por cada muestra, con el nombre y/o iniciales del nombre y apellido de cada estudiante del que se obtuvo muestra.
Dispensar en los tubos eppendorf de 2.0 mlpreviamente marcados, 1.5 ml de buffer de lisis de Glóbulos Rojos.
Con punta y pipeta de 1000 µl tomar 500 µl de sangre total de las muestras y agregarla en el tubo eppendorff que contiene 1,5 ml de Buffer deLisis de Glóbulos Rojos.
Tapar los tubos y agitar por inversión hasta que se lisen los glóbulos rojos y esperar que tomen un color rojo tinta (INMEDIATAMENTE SE OBSERVE LA LISIS DE LOS GLÓBULOSROJOS, LLEVAR LOS TUBOS A LA CENTRIFUGA).
Centrifugar a 12000 RPM por 3 min los tubos eppendorf de 2.0 ml.
Descartar el sobrenadante en el recipiente dispuesto para descarte de residuos y cerrar cadatubo.
Desprender los pellet y destapar los tubos colocándolos en una gradilla.

Agregar 1ml de Buffer de Lisis de Glóbulos Rojos a los tubos eppendorf de 2.0 ml que tienen el pellet desprendido,tapar los tubos, agitar por inversión y dejar de 2 o 3 minutos antes de llevarlos a la centrifuga.
Centrifugar a 12000 RPM por 3 min.
Descartar el sobrenadante, limpiar el exceso de sangre presente enel tubo con un papel absorbente, teniendo cuidado de no limpiar el pellet obtenido.
Desprender el pellet y abrir el tubo.
Agregar 500 µl de buffer de lisis nuclear y 333ul de solución de precipitadode proteínas a cada tubo y taparlo.
Agitar entre 30 y 40 segundos a cada tubo eppendorf, se le puede dar agitación como máximo a 4 tubos al tiempo.
Centrifugar a 12000 RPM por 3 min.
Marcar...