Procesamiento De Tejidos

Procesamiento de tejidos. Resumen.
Preparación e investigación de tejidos muertos.
• Fijación:
Es detener los procesos celulares dinámicos con la mayor rapidez y estabilidad posible, así como mantener la estructura con las mínimas modificaciones posibles. Esto se logra con la coagulación o insolubilización de los componentes y formando enlaces cruzados por los fijadores.
En el proceso seestabilizan las proteínas, lo cual mantienen sus relaciones entre las estructuras como en la materia viva. Las proteínas solubles se unen a las estructuras y se transforman así en insolubles.
Fijadores efectivos son el formaldehido y en especial el grutaraldehido, pues son efectivos en la formación de enlaces transversales, el tetroxido de osmio, el cual ayuda a mantener el aspecto de la célula encondiciones muy similares a las que se observan en el microscopio en contraste de fase, así como el control de la estructura de las células vivas.
Estos fijadores, producen inactivación de algunas enzimas celulares las cuales podrían iniciar autolisis y a la degeneración post mortem. Elimina bacterias y muchos otro microrganismos que puedan alterar y destruir el tejido.

• Inclusión y corte.
Alser cortado en secciones delgadas que permiten el paso de la luz (5 a 10 ᶣm). para ello se requiere de un micrótomo, un aparato especializado que corta el tejido en secciones muy delgadas. Después de obtener la consistencia necesaria que permita el paso de la luz, se trata mediante medio de inclusión con ceras insolubles, por lo general parafina, para ello; antes de la inclusión el tejido debesometerse a una deshidratación utilizando soluciones acuosas de etanol o alcohol etílico en grandes concentraciones. El proceso de sumergir el etanol con la parafina de le llama aclaramiento y forma con el tejido, un bloque sólido o “taco”.
• Congelamiento:
Para evitar problemas, como la extracción de grasas y la inactivación de enzimas, este método histológico efectúa el proceso de corte porcongelamiento, a diferencia del anterior, el tejido, es cortado mediante un criostato, esta técnica es tan rápida que se pueden obtener secciones en pocos minutos.


• Método de congelación- desecación.
Con este método se intenta lograr que la variación estructural y extracción química sean las mínimas posibles para conservar la actividad enzimática.
• Método de congelación-sustitución.
Estemétodo es muy poco agresivo con el tejido y es apropiado para métodos inmunohistoquímicos.
• Coloración.
Estos métodos se desarrollan en función de su capacidad para teñir selectivamente los distintos componentes tisulares.
El método de tinción mas utilizado es una combinación de hematoxilina y eosina, pues tiñe los componentes nucleares de azul violáceo, mientras que casi todas las estructurascitoplasmáticas adquieren una tonalidad rosada, esta tinción con HE muestra con nitidez la forma y la estructura del núcleo y la célula, sin embargo esta tinción es un procedimiento químico.

Preparación de tejidos para microscopia electrónica.
En este tipo de métodos, se agudizan las exigencias de mantener las estructuras originales de tejido, pues los tejidos y estructuras pueden ser observadoscon mayor nitidez y detalle.
Para su fijación se suele usar glutaraldehido y tetróxido de osmio, el cual además de fijar; se una con las membranas lipoproteicas y logra así un mejor contraste de la imagen.
Después de su fijación se deshidrata y se incluye en el tejido, para su inclusión se utilizan resinas epoxi y materiales plásticos que adquieren gran dureza y permiten costes ultrafinos, sinembargo, no deben exceder de 20-100 nm. Para ello se necesita un ultramicrotomo, con ello se obtiene cortes de 1ᶣm y su posterior tinción con azul de toluidina, pues penetra en los medios de inclusión de resinas epoxi, los cortes semifinos pueden ser incluidos en resinas acrílicas.


• Congelación y fractura:
Se aplica a la investigación de tejidos por microscopia electrónica pues congela...