Procesar Analisis clínicos

Glucosa Liquicolor

Significado Clínico: Para la determinación cuantitativa de Glucosa enzimática colorimétrica en suero, plasma o líquido cerebro espinal.


Fundamento: La determinación de los niveles de glucosa fue el primer procedimiento empleado en el laboratorio clínico médico. La metodología de glucosa-oxidasa fue introducida por Keilin y Hartree en 1948. Más tarde Keston reportó eluso de un reactivo combinando glucosaoxidasa-peroxidasa, seguido por el de Teller adicionando un reactivo cromogénico al procedimiento de Keston. En particular, el método del reactivo de glucosa Stanbio está basado en la técnica descrita por Trinder.

La glucosa es oxidada en presencia de glucosa oxidasa (GOD). El peróxido de hidrogeno formado, reacciona bajo la influencia de peróxidasa (POD) confenol y 4-aminoantipirina para formar un complejo rojo-violeta de quinona. La intensidad del color es proporcional a la concentración de glucosa.

Glucosa + O2 + H2O2 GOD Acido Glucónico + H2O2
H2O2+4-Aminoantipirina+Fenol POD Complejo quinona

Material:
Reactivos:
1. 4-Aminoantipirina ...............................................……. 0.2 mmol/L
2. GlucosaOxidasa………..………………………………15.0 mmol/L
3. Peroxidasa .................................................................…… 1.2 U/L
4. Fenol……………………………………………………..…4.0 mmol/L
Espectrofotómetro capaz de leer absorbancia a 500 nm.
Pipetas automáticas.
Bloque de calor o baño de temperatura controlada a 310 K (37°C).
Cubetas.
Agitador.
Cronómetro.
Suero.

Procedimiento:
1. Coloque en cubetas lossiguientes volúmenes (mL) y mezcle bien:

Reactivo Blanco (RB)
Estándar
(E)
Muestra
(M)
Reactivo
1.0
1.0
1.0
Estándar
-
0.01
-
Muestra
-
-
0.01

2. Incube las cubetas a 310 K (37°C) por 5 minutos o a temperatura ambiente 288-303 K (15-30°C) por 10 minutos.
3. Lea E y M contra RB a 500 nm antes de 60 minutos.
Cálculos: Los valores se derivan de la siguiente ecuación:Glucosa (mg/dL) = AM /AE X 100
Donde AM y AS son los valores de las absorbancias de la muestra y el estándar respectivamente, y 100 es la concentración del estándar (mg/dL).

Valores Esperados: Suero/Plasma 70-105 mg/dL (3.9-5.8 mmol/L).




















Stanbio Creatinina LiquiColor
Significado Clínico: Para la determinación cuantitativa colorimétrica cinética de creatininaen suero u orina.


Fundamento: La creatinina reacciona con el ácido pícrico en un medio alcalino para formar un complejo de color el cual absorbe a 510 nm. La velocidad de formación del color es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra.

Creatinina + Acido Pícrico Alcali Complejo de creatinina-picrato (amarillo-naranja)


Material:
Reactivos:
1. CreatininaÁcida: Solución acuosa de ácido pícrico, 3.6 mmol/L..
2. Creatinina Base: Solución acuosa de hidróxido de sodio, 240 mmol/L.
3. Estándar de creatinina - 5 mg/dL:
4. Solución acuosa de creatinina con cloruro de zinc, 5.0 mg/dL.
Espectrofotómetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 510 nm con 1 cm de paso de luz.
Pipetas serológicas o automáticas
Cubetas o tubos de ensayo
Agitador (tipoVortex)
Cronómetro.
Suero

Procedimiento:
1. Coloque las celdillas del espectrofotómetro a 37°C.
2. Lleve a cero el espectrofotómetro con un blanco de agua a 510 nm.
3. Pipetee 1 mL del reactivo en cada tubo de ensayo y preincube por 3 minutos a 37°C.
4. Transfiera 0.05 mL (50 μL) del estándar en el tubo de ensayo, mezcle inmediatamente y pase a una celdilla de lectura.
5. Transcurridosexactamente 20 segundos, lea y registre la absorbancia (A1).
6. Exactamente 60 segundos después de la lectura inicial lea y registre la absorbancia final (A2).
7. Calcule el cambio de absorbancias DA restando (A2 – A1).
8. Corra los controles y las muestras de los pacientes como se indica en los pasos del 1 al 7.
Cálculos: Los valores resultan de comparar el cambio de absorbancia (ΔA) de...