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Utilidad de las técnicas de biología molecular
en el diagnóstico del síndrome X-frágil

El síndrome X-frágil representa la primera causa de retraso
mental hereditario, afecta aproximadamente a uno de cada
4,000 varones y a una de cada seis mil mujeres de la
población general. El cuadro clínico de estos pacientes
incluye retraso mental, anormalidades físicas y trastornos
de la conducta. En1969, Lubs describió, en varios individuos
con retraso mental, una fractura en el extremo distal del
brazo largo del cromosoma X, a la que posteriormente se le
denominó X-frágil. Durante más de 10 años (1979-1991), el
estudio cromosómico fue la prueba de elección para confirmar
el diagnóstico clínico. La existencia de al menos 4% de
metafases con un cromosoma X-frágil se consideraba unaprueba positiva en varones clínicamente afectados. En
mujeres portadoras de la mutación, esta prueba se mostraba
menos sensible, y en ocasiones no se encontraba fragilidad
en ninguna metafase. Esto, junto con las dificultades técnicas
del cultivo celular con medios pobres en ácido fólico, los
resultados falsos positivos debido a la presencia de otros
sitios frágiles adyacentes a éste, la faltade discriminación
entre premutaciones y mutaciones completas y los requerimientos
en tiempo y costo, fueron los principales inconvenientes
del estudio cromosómico como método de diagnóstico
de este padecimiento.1
En 1991, Verkerk y colaboradores lograron identificar
la alteración génica causante del síndrome X-frágil. La
mutación se encontraba en un gen situado en el sitio Xfrágil(Xq27.3) y la denominaron FMRI (Fragile X Mental
Retardation 1). Dicha mutación consiste en una expansión
del trinucleótido CGG ubicada en la región 5’ no traducida
del exón 1 de este gen. Estudios posteriores determinaron
que el número de repetidos CGG, presente en la población
normal, variaba entre 5 y 50; mientras que en portadores el
número incrementaba de 50 a 200 repetidos.Los individuosafectados muestran de 200 a 1000 o más repetidos, lo que
desencadena un fenómeno de hipermetilación que da lugar
al silenciamiento del gen y por ende ausencia de la
proteína. Desde el descubrimiento de la mutación responsable,
la detección de la secuencia repetitiva en el gen ha
constituido el método de elección para realizar el diagnóstico
molecular del síndrome.1,2
En 1993, Verheij ycolaboradores identificaron la
proteína del gen FMRI, a la que se denominó FMRP
(Fragile Mental Retardation Protein), cuya ausencia causa
el fenotipo clínico del síndrome.
Estudios iniciales, mediante Western blot en líneas
celulares linfoblastoides, demostraron que los individuos
con la mutación completa del gen FMRI carecían de la
proteína, mientras que aquellos que presentaban la
premutaciónla expresaban en niveles normales. La FMRP
es una proteína con afinidad por el ARNR, al que se une en
su subunidad 60S. Aunque la proteína se ha localizado en
el nucléolo, fundamentalmente se encuentra en el citoplasma
unida a polisomas traduciendo activamente. Su ausencia
afecta principalmente cerebro y gónadas.2
Actualmente se ha diseñado una serie de técnicas
moleculares que permitenrealizar el diagnóstico de estos
pacientes, entre las que se incluyen Southern blot, reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) y análisis inmunohistoquímico.
Cada una de ellas presenta ventajas y desventajas
que serán analizadas en esta breve revisión.
Southern blot
Es el procedimiento de diagnóstico molecular más frecuentemente
utilizado, permite visualizar en forma directa el
tamaño de lassecuencias repetitivas tanto en individuos
normales como en premutados y mutados. Esta técnica
puede usarse asociada o no a PCR y con o sin marcaje
radiactivo; sin embargo, su utilización tiene algunos inconvenientes
derivados de su complejidad, costo y requerimientos
de tiempo y esfuerzo. Por otro lado, no permite determinar
en forma precisa secuencias repetitivas de tamaño
pequeño, lo...