Prolactina

PRACTICA 1 ENDOCRINOLOGIA
“CUANTIFICACIÓN DE LA HORMONA PROLACTINA”
OBJETIVO
Que el alumno analice y compare cuantitativamente la concentración de la hormona prolactina(LTH) en el suero de vacas en producción y de vacas secas.
INTRODUCCION
HORMONA LUTEOTROPICA O PROLACTINA
La prolactina es una hormona peptídica segregada por la parte anterior de la hipófisis, la adenohipófisis, queestimula la producción de leche en las glándulas mamarias y la síntesis de progesterona en el cuerpo lúteo. Las hormonas que tienen un efecto sinérgico son: los estrógenos, la progesterona y la GH. La succión del pezón durante la lactancia favorece la síntesis de mayor cantidad de esta hormona. Además, es uno de los pocos sistemas fisiológicos que poseen retroalimentación positiva, de forma que lapresencia de prolactina en el organismo favorece la producción de este péptido.
PRL:
• En las mujeres, la PRL estimula la lactancia
• En los hombres, la PRL disminuye la secreción de LH (un exceso de PRL puede disminuír los niveles de andrógenos y causar esterilidad)
• Es controlada por PRH (?) y PIH
Prolactina
1. Química – estructuralmente relacionada con la GH.
2. Regulación de la liberacióna) Estímulo—
Los factores fisiológicos que influyen la secreción de GH tienen efectos similares sobre la secreción de prolactina.
Los niveles de Prolactina se elevan durante el embarazo, alcanzando niveles máximos al término. En madres lactantes, la succión produce liberación de prolactina.
b) PRH estimula la liberación de prolactina se desconoce la estructura de la PRH
La TRH también produceliberación de prolactina, pero no se ha establecido el significado fisiológico

3. Regulación de la liberación
c) PRIH – control primario de la prolactina
La PRIH es liberada por Dopamina y agonistas de dopamina. El incremento de dopamina produce aumento de la PRIH y disminuye la prolactina
Tiene potencial clínico para inhibir la lactancia
Acciones Fisiológicas
a) Iniciación y mantenimientode la lactancia. Los estrógenos y la progesterona bloquean estas acciones de la prolactina durante el embarazo.
b) Prepara la glándula mamaria para la lactancia promoviendo el crecimiento (proliferación y diferenciación de epitelio mamario alveolar y ductal).
c) Inhibe la liberación de LH y FSH así como sus efecto sobre los ovarios y las gónadas.

MATERIAL
* Placa de Micro valoracióncubierta con anticuerpos con 96 pozos
* Reactivo de Conjugado Enzima 12ml
* Estándares de referencia de prolactina que contienen o.o, 7.5, 25, 60, 120, 240 ng/mL liofilizado
* Sustrato TMB 12ml
* Solución de Frenado –Stop Solution- 12 ml
* Solución Buffer de lavado 50X
* Pipetas de precisión de 50l, 100 l, 200 l, y 1 ml
* Agua destilada
* Puntas de pipetadesechables
* Papel absorbente o toalla de papel
* Lector Microelisas con lente a 450 nm de longitud de onda con una banda de amplitud de 10 nm o menor y un rango de densidad óptica de 0-2 OD o mayor.
METODOLOGÍA
1. Asegúrese el número deseado de Micropozos revestidos en el soporte.
2. Vierte 50 l de estándares, especímenes y controles en los pozos apropiados.
3. Vierta 100 l deReactivo Enzima conjugada.
4. Mezcle perfectamente por 30 segundos. Es muy importante mezclar completamente en este paso.
5. Incube a temperatura ambiente (18-25 °C) por 60 min.
6. Retire la mezcla de incubación con un movimiento repentino y depositando el contenido de la placa en un recipiente.
7. Enjuague y sacuda con movimientos repentinos los Micropozos 5 veces con Solución Buffer1x.
8. Golpee la placa de Micropozos sobre el papel absorbente para remover las gotas de agua residuales.
9. Vierta 100 ml de solución TMB en cada micropozo. Mezcle suavemente por 5 segundos.
10. Incube a temperatura ambiente por 20 minutos.
11. Frene la reacción al agregar 100 ml de Solución de frenado a cada pozo.
12. Mezcle ligeramente por 30 segundos. Es importante...