Propiedades Estructurales

Propiedades estructurales y biológicas de Mycoplasmavirus MVL3: una Interacción inusual Virus-procariota.
La cinética de la adsorción y el crecimiento de mycoplasmavirus MVL3 en células huésped Acholeplasma laidlawii 1305/68 han sido estudiada con crecimiento de un paso, lisis prematura, y experimentos de una sola ráfaga. El virus fue encontrado que matar células huésped infectadas. Laliberación del virus comienza 90 min después de la infección y continúa durante aproximadamente 10 a 15 h. Por lo tanto, la producción de virus es diferente de los bacteriófagos líticos y clásicos y se asemeja a virus animales citocidas no líticos. Los detalles estructurales del virus se describen, y el peso molecular del ADN viral lineal ha sido encontrado ser de 26 x 106.
Tres tipos diferentes demycoplasmaviruses que infectan a Acholeplasma laidlawii fueron originalmente aislado por Gourlay (7, 8, 10). Estos y aislamientos posteriores forman tres grupos (revisado por Manilof et al, 15):. (i) el grupo 1 de aislados son viriones desnudos en forma de bala. Un aislado, MVL51, fue demostrado que contienen una molécula circular de ADN de hebra única de 1,5 x 106 daltons (17). (ii) El grupo 2 devirus son partículas envueltas esféricas. Los aislados MVL2 contiene ADN bicatenario en un círculo superhelicodal cerrado covalentemente de aproximadamente 7,8 x 106 daltons (13, 16). (iii) El único grupo 3 mycoplasmavirus aislado es MVL3. Este virus es una partícula poliédrica desnuda (alrededor de 60 nm de diámetro) con una cola corta (alrededor de 25 nm de largo), que contiene DNA de doble hebra(6).
Los estudios de los ciclos infecciosos de los grupos 1 y 2 mycoplasmaviruses (revisado por Manilof et al., 15) han demostrado que ambos son virus no citocidal: infectando células para continuar creciendo mientras que el virus libera progenie. En un estudio preliminar sobre el ciclo de infección de MVL3 Liss (12) observó que las células infectadas mueren.
Reportamos aquí un estudio del ciclode la infección MVL3 mostrando que, mientras que las células infectadas son ya no viables (es decir, ya no son capaces de formar colonias), la progenie del virus continúa siendo liberada a partir de estas células durante muchas horas. Este tipo de ciclo infeccioso se asemeja a la virus de animales citocidales no líticos en lugar de la de bacteriófagos líticos. . También se presentan datos sobrela estructura del virión y el ADN viral.

MATERIALES Y MÉTODOS
Medios y amortiguadores. Caldo de triptosa (que contiene, por litro, 20 g de triptosa [Difco], 5 g de Tris, 5 g de NaCl, 10 g de glucosa, y 10 ml de PPLO fracción de suero [Difco]) y placas de agar triptosa (que contiene 1% de agar [Difco] en caldo de triptosa) se utiliza para el cultivo de células como se describe por Manilof (14).Buffer Tris-EDTA-NaCl (TES) (0,01 M Tris-hidrocloruro, 0.001 M EDTA, 0,1 M NaCl [pH 8,0]) fue utilizado para lavar las células y para el procedimiento de purificación MVL3.
Células y virus. A. laidlawii 1305. K2 se utilizó como la célula huésped en todos los experimentos. Este clon se aisló de la cepa A. laidlawii M1305/68, que fue amablemente suministrado por Gourlay (9). El clon 1305. K2(referido como K2) fue seleccionado por su alta eficiencia de formación de placas con mycoplasmavirus MVL3 de un número de clones M1305/68 aislados al azar.
En todos los experimentos cultivados durante la noche (fase estacionaria) de K2 se diluyó 1:5 en medio fresco y se incubaron durante 2 horas a 37 °C antes de que el virus se añadiera.
Mycoplasmavirus MVL3 se hizo crecer a partir de una muestradel aislamiento original de Gourlay y Wyld (10). Para preparar un stock de virus, 200 ml de un cultivo nocturno de K2 se añadió a 800 ml de caldo de triptosa y, después de 2 h de incubación a 37 °C, MVL3 se añadió a una multiplicidad de infección (MOI) de 1. El cultivo fue incubado a 37 °C durante 24 h. La suspensión resultante a continuación se precipitó mediante la adición de polietileno...