Propiedades y cuantificación de las proteínas

Propiedades y Cuantificación de proteínas

Resumen A través de dos métodos de cuantificación (método de Biuret y método de Warburg) se medirá la concentración de dos proteínas (Caseína y la ovoalbúmina) y se podrá inferir cual de los dos métodos es el más idóneo para este caso. Además se preparara un set de tubos para analizar el efecto del pH que tiene sobre la solubilidad de laCaseína informando el grado de turbidez y el pH de cada tubo, determinando un rango donde pueda estar el punto isoeléctrico de la solución. Finalmente se analizará el efecto que tiene la fuerza iónica sobre la solubilidad de la Ovoalbúmina con esto se pretende identificar el Saltin in, el Salting out , el punto isoeléctrico y el punto de mayor solubilizacion.

Materiales y métodos

MaterialesPatrón de caseína 10 mg/ml (muestra 3), Solución NaCl 0.1N, Reactivo de Biuret, Patrón de caseína (6mg/ml) preparada en acetato de sodio 0.1N, Agua destilada, Ácido acético 0.01N, Ácido acético 0.1N, Ácido acético 1N, Concentrado de Ovoalbúmina, Solución NaOH 0.1N, Solución NaOH 2N y Sulfato de amonio.

Método Biuret

Se procedió a determinar la concentración en mg/ml de una muestrade Caseína problema que se encontraba entre un rango de concentración que va desde los 1 a los 10 mg/ml. Para lo anterior se hizo uso del método de Biuret, preparándose una curva de calibración con la solución de caseína patrón de 10mg/ml, de tal manera que se crearon cuatro patrones de 1ml cada uno con concentraciones de 10, 5, 2.5, 1.125 mg/ml mediante disolución del patrón proteico consolución de Nal 0.1N.

Efecto del pH sobre la solubilidad de la Caseína

Se preparó un set de 5 tubos de ensayo, en los que se colocó un volumen de 1 ml de una solución de caseína (6 mg/Ml) en acetato de sodio 0.1N, agua destilada y ácido acético de concentración y volumen variante para cada tubo, de tal forma que los tubos llegasen a un volumen final de 10ml. Para el primer tubo se agregó 0.6ml de ácido acético 0.01N, para el segundo 0.5ml de ácido acético 0.1N, para el tercero 1ml de ácido acético 0.1N, para el cuarto 2ml del ácido anterior a la misma concentración y para el quinto 1.6ml de ácido acético 1N. Con los datos anteriores se procedió a determinar la turbidez de los tubos visualmente e informar el punto isoeléctrico de la proteína a investigar.

A su vez se preparó untubo de ensayo con 1ml de blanco (NaCl 0.1N) y un tubo de muestra con 1ml de muestra problema. Además se agregó a cada tubo 4ml del reactivo de Biuret, se agitaron y se dejaron en reposo a temperatura ambiente por 20 minutos. Finalizado ese periodo de tiempo, se leyeron las soluciones en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm.

Método Warburg

Se procedió a calcular laconcentración de la misma muestra problema del experimento anterior pero mediante este método. Para ello se procedió tomar 1ml de muestra, la cual se llevó a un volumen total de 8ml mediante disolución con NaCl 0.1N. Una vez preparada la muestra, se utilizó un espectrofotómetro UV, el cual se calibró con la solución blanco de NaCl 0.1N, de modo que luego se leyó la muestra a una longitud de onda de280nm. Posteriormente ocupando el blanco nuevamente se ajustó el espectrofotómetro y se leyó la muestra a 260nm.

Efecto de la fuerza iónica sobre la solubilidad de la Ovoalbúmina

El desarrollo se dividió en dos partes, Salting In y Salting Out.

Salting In, se tomaron 2 gotas de ovoalbúmina a la que se le agregó 5ml de agua destilada. Posteriormente se agregó ácido acético 0.1N por gotas y conagitación, observándose hasta el enturbiamiento del tubo, momento en el que se continuó agregando ácido hasta la desaparición del enturbiamiento. Una vez volviendo al color original, se agregó NaOH hasta observar nuevamente un enturbiamiento en el tubo, con la consiguiente lenta adición de una solución de NaCl 2M hasta la desaparición de dicho enturbiamiento.

Salting Out se prepararon 5...